【摘要】：目的:研究胃袖狀切除術(shù)(SG)和Roux-En-Y胃旁路術(shù)(RYGB)對肥胖大鼠攝食量、體重、肝脂肪變性、脂肪分布的影響及引起的FSP27表達(dá)變化;研究FSP27在肥胖大鼠和減重手術(shù)大鼠脂肪組織中、3T3-L1成熟脂肪細(xì)胞中對脂質(zhì)水解與合成的調(diào)節(jié)作用以及對能量穩(wěn)態(tài)的影響;探索能量、營養(yǎng)因素的改變對PPARγ/FSP27及下游脂肪水解酶的作用。為解決臨床減重術(shù)后患者出現(xiàn)體重?zé)o法下降至預(yù)期、甚至復(fù)胖現(xiàn)象,為尋找輔助乃至代替有創(chuàng)手術(shù)達(dá)到減重效果的潛在方式提供理論和實驗依據(jù)。方法:本研究第一部分建立肥胖、肥胖假手術(shù)、肥胖胃袖狀切除術(shù)、肥胖胃旁路術(shù)大鼠模型,術(shù)后4周連續(xù)測量各組大鼠攝食量、體重,術(shù)后第28天檢測血漿、脂肪、肝臟中甘油三酯含量,HE染色和油紅染色觀察肝臟細(xì)胞形態(tài)變化,對比肥胖大鼠在減重手術(shù)前后肝脂肪變性的改善,雙能X線測量法測量大鼠身體組成和脂肪分布。免疫組織化學(xué)染色觀察大鼠白色脂肪和棕色脂肪組織FSP27含量、細(xì)胞及脂滴形態(tài)。qRT-PCR檢測FSP27和棕色脂肪標(biāo)記蛋白UCP1。第二部分采用Western blot檢測術(shù)后2周和4周大鼠軀干脂肪FSP27、HSL、p-HSL、ATGL、CGI-58、DGAT1和DGAT2的蛋白表達(dá)。將成熟3T3-L1脂肪細(xì)胞分別于對照培養(yǎng)基(10%FBS、5 mmol/L葡萄糖的DMEM培養(yǎng)基),高脂培養(yǎng)基(0.2 mmol/L、0.5 mmol/L、1 mmol/L棕櫚酸);高糖培養(yǎng)基(10 mmol/L、25 mmol/L、35 mmol/L葡萄糖);高營養(yǎng)培養(yǎng)基(20%、30%、50%FBS)培養(yǎng)48小時,Western blot檢測FSP27表達(dá)變化并篩選作用最佳濃度。免疫熒光檢測脂肪細(xì)胞中FSP27表達(dá)及亞細(xì)胞定位,Western blot檢測HSL和ATGL蛋白表達(dá)變化。檢測誘導(dǎo)成熟并沉默F(xiàn)SP27的3T3-L1脂肪細(xì)胞中FSP27、HSL和ATGL的mRNA和蛋白表達(dá),在對照培養(yǎng)基和最佳濃度的高脂、高糖、高營養(yǎng)培養(yǎng)基中培養(yǎng)后再次檢測HSL和ATGL的蛋白表達(dá)。第三部分檢測術(shù)后2周和4周大鼠附睪脂肪PPARγmRNA含量和蛋白表達(dá)。Western blot檢測高脂、高糖、高營養(yǎng)對成熟3T3-L1脂肪細(xì)胞PPARγ的影響。通過siRNA和質(zhì)粒轉(zhuǎn)染使3T3-L1前脂肪細(xì)胞PPARγ基因過表達(dá)或沉默,檢測FSP27、HSL、ATGL mRNA含量及蛋白表達(dá)。過表達(dá)3T3-L1細(xì)胞PPARγ并沉默F(xiàn)SP27,誘導(dǎo)至成熟后給予高脂、高糖、高營養(yǎng)作用,檢測PPARγ、FSP27、HSL、ATGL的蛋白表達(dá)。結(jié)果:本研究第一部分中:減重手術(shù)SG和RYGB有效減少大鼠術(shù)后攝食量和降低體重,減重手術(shù)組大鼠術(shù)后體重快速下降直至進入第4周開始出現(xiàn)減緩;SG和RYGB有效降低大鼠血漿、脂肪、肝臟中的TAG含量,明顯改善肥胖大鼠的肝臟脂肪變性;SG和RYGB在大鼠術(shù)后4周顯著降低全身脂肪含量(%)和脂肪量,以軀干脂肪減少最顯著,但幾乎不改變瘦體重;SG和RYGB使大鼠附睪、腎周脂肪細(xì)胞直徑減小,多室脂滴出現(xiàn),使FSP27和UCP1 mRNA升高,促進白色脂肪向棕色脂肪轉(zhuǎn)化;RYGB較SG對大鼠有著更為顯著的代謝益處。本研究第二部分中,減重術(shù)后白色脂肪中的FSP27蛋白濃度呈現(xiàn)由低到高的動態(tài)改變,響應(yīng)其變化的是脂肪水解酶含量由術(shù)后快速升高到逐漸降低,但始終高于肥胖對照和假手術(shù)大鼠。而甘油三酯合成酶僅由輕度降低到恢復(fù)至接近肥胖(對照)大鼠水平。在肩胛間棕色脂肪中FSP27的這種升高現(xiàn)象更早于白色脂肪的出現(xiàn)。高脂、高糖、高營養(yǎng)培養(yǎng)基均顯著降低FSP27蛋白含量,其中棕櫚酸作用的最佳濃度為0.5 mmol/L,葡萄糖為35 mmol/L,血清為50%。在高脂環(huán)境下FSP27蛋白濃度降低,卻未引起HSL和ATGL的顯著變化;高糖環(huán)境引起FSP27的降低和HSL的升高,ATGL無變化;高營養(yǎng)環(huán)境下FSP27的降低與ATGL的升高同時存在,HSL則輕度下降。沉默F(xiàn)SP27基因的3T3-L1脂肪細(xì)胞HSL、ATGL mRNA含量和蛋白表達(dá)顯著升高,高脂、高糖、高營養(yǎng)則并未使其HSL和ATGL蛋白濃度產(chǎn)生明顯變化。本研究第三部分中:減重術(shù)后大鼠附睪脂肪組織PPARγmRNA含量和蛋白表達(dá)呈現(xiàn)由降低到升高的改變。高脂、高糖、高營養(yǎng)作用使成熟脂肪細(xì)胞PPARγ蛋白表達(dá)顯著低于對照組。PPARγ基因沉默后的成熟3T3-L1脂肪細(xì)胞中FSP27、HSL、ATGL的mRNA和蛋白含量顯著降低;PPARγ過表達(dá)則使FSP27、HSL、ATGL的mRNA和蛋白表達(dá)升高。高脂高糖高營養(yǎng)培養(yǎng)基并未使PPARγ過表達(dá)且沉默了FSP27的成熟3T3-L1脂肪細(xì)胞中HSL和ATGL的蛋白表達(dá)產(chǎn)生顯著變化。結(jié)論:FSP27具有平衡調(diào)節(jié)脂質(zhì)分解和儲存的功能,其表達(dá)隨能量和營養(yǎng)供應(yīng)的變化而變化。在能量、營養(yǎng)等環(huán)境因素作用下,FSP27受到PPARγ的正向調(diào)控進而通過調(diào)節(jié)HSL、ATGL的表達(dá),介導(dǎo)脂滴的形成,抑制脂肪的過度水解和沉積。
【圖文】：

3）含有慶大霉素的生理鹽水溶液腹腔沖洗。3-0 不可吸收手術(shù)縫合線連續(xù)縫合關(guān)閉腹壁肌層及皮膚。圖1.1 假手術(shù)、胃袖狀切除術(shù)、Roux-En-Y胃旁路術(shù)中圖像2.2.5 術(shù)后護理術(shù)后大鼠均單籠飼養(yǎng)，三天內(nèi)每日慶大霉素皮下注射（0.8 mg/100g BW）。術(shù)后 24 小時禁食水，，一天后自由飲用低濃度糖水供能。術(shù)后 48 小時如無明顯嘔吐、嘔血等癥狀則不限量喂食固體顆粒粉末飼料（自行研磨），觀察無進食障礙后，過度至標(biāo)準(zhǔn)固體高脂飼料。純凈水隨意攝取。術(shù)后仔細(xì)觀察并記錄并發(fā)癥發(fā)生情況，如發(fā)現(xiàn)死亡即刻解剖分析。

制了大鼠術(shù)后的攝食量，其中 RYGB 效果優(yōu)于 SG。假手術(shù)盡管一定程度上引起了攝食量減少，但效果不如 RYGB 和 SG，且較快恢復(fù)（圖 1.2）。圖1.2 大鼠手術(shù)后4周攝食量變化*P <0.05 vs. Control group,#P <0.05 vs. Sham group3.2 減重手術(shù)降低肥胖大鼠體重手術(shù)后在 45%高脂飲食喂養(yǎng)下，Control 組與 Sham 組大鼠體重仍持續(xù)增加。
【學(xué)位授予單位】：中國醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R656.6;R-332

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本文編號：2678640