【摘要】：第一部分microRNA-223-3p和LIF在人類子宮內(nèi)膜組織中表達水平的檢測目的：檢測內(nèi)分泌功能正常、月經(jīng)周期規(guī)則的女性的增生期、分泌中期子宮內(nèi)膜組織中的microRNA-223-3p (miRNA223)和LIF的表達情況,探索miRNA223和LIF是否參與對胚胎植入的調(diào)控。方法：采用Real-time PCR (RT-PCR)的方法檢測增生期、分泌中期的人類子宮內(nèi)膜組織中miRNA223和LIF mRNA的表達情況。采用免疫組化(IHC)的方法檢測增生期、分泌中期的人類子宮內(nèi)膜組織中LIF蛋白的表達情況和細胞定位。結(jié)果：RT-PCR的結(jié)果顯示,miRNA223在增生期子宮內(nèi)膜組織中的表達水平顯著高于分泌中期,而LIF mRNA在增生期子宮內(nèi)膜組織中的表達水平顯著低于分泌中期;IHC的結(jié)果顯示,LIF蛋白在分泌中期子宮內(nèi)膜組織中的表達水平顯著高于增生期。LIF蛋白在分泌中期子宮內(nèi)膜的腔、腺上皮細胞中高度表達,在基質(zhì)細胞中亦有表達。結(jié)論：miRNA223和LIF在人類子宮內(nèi)膜組織中的表達存在一定的時間、空間依賴性規(guī)律,該結(jié)果提示miRNA223和LIF可能參與對胚胎植入的調(diào)控,在胚胎植入過程中發(fā)揮重要作用。miRNA223和LIF的表達水平存在一定的負性相關性,該結(jié)果提示miRNA223和LIF在圍著床期可能存在相互作用關系。以上結(jié)果尚需動物實驗、細胞實驗進一步驗證。第二部分microRNA-223-3p通過調(diào)節(jié)LIF的表達和胞飲突的形成抑制小鼠胚胎植入目的：檢測孕、非孕小鼠子宮內(nèi)膜組織中miRNA223、LIF的表達情況。探索miRNA223是否通過抑制LIF的表達和胞飲突的形成進而影響胚胎植入。方法：采用RT-PCR的方法對孕、非孕小鼠子宮內(nèi)膜組織中miRNA223、LIF mRNA的表達進行檢測。采用Western Blot的方法對孕、非孕小鼠子宮內(nèi)膜組織中的LIF蛋白進行檢測。孕第3天上午使用miRNA223激動劑(miRNA223-Agomir)對孕小鼠進行單側(cè)宮角注射,孕第4天下午犧牲小鼠,采用RT-PCR的方法檢測miRNA223、LIF mRNA的表達情況：采用IHC的方法檢測LIF、VEGF、CD34蛋白的表達情況：采用透射電鏡的方法檢測小鼠子宮內(nèi)膜胞飲突的形成情況。孕第9天上午犧牲小鼠,解剖并進行植入胚胎計數(shù)。結(jié)果：孕小鼠子宮內(nèi)膜組織中的miRNA223表達水平顯著低于非孕小鼠,而LIF mRNA及蛋白的表達水平顯著高于非孕小鼠。宮角注射miRNA223-Agomir后,注射側(cè)的miRNA223表達水平顯著高于注射對側(cè),而注射側(cè)LIF蛋白的表達水平顯著低于注射對側(cè)。電鏡結(jié)果顯示,注射側(cè)的小鼠子宮內(nèi)膜中胞飲突形成顯著受損。注射側(cè)植入胚胎數(shù)顯著低于注射對側(cè)。結(jié)論：小鼠子宮內(nèi)膜組織中miRNA223、LIF的表達規(guī)律與人類類似。miRNA223可以抑制胚胎植入,該效應可能是通過下調(diào)LIF蛋白的表達水平和阻礙胞飲突的形成而實現(xiàn)的。miRNA223是否直接作用于LIF并發(fā)揮生物學作用,LIF具體通過何種機制影響胞飲突,尚需進一步的研究。第三部分microRNA223-3p通過直接抑制LIF的表達干擾子宮內(nèi)膜上皮細胞骨架目的：驗證miRNA223對LIF的調(diào)控作用是否屬于直接作用；胞飲突是圍著床期子宮內(nèi)膜腔上皮細胞發(fā)生形變的產(chǎn)物,探索miRNA223是否通過下調(diào)LIF蛋白的表達水平影響子宮內(nèi)膜上皮細胞的細胞骨架而損害胞飲突的形成。方法：使用miRNA223過表達克隆和LIF3' UTR端靶標克隆轉(zhuǎn)染293T細胞并進行熒光素酶檢測。使用miRNA223前體克隆對體外培養(yǎng)的子宮內(nèi)膜上皮細胞來源的HES、RL95-2細胞系進行過表達干預,采用細胞免疫熒光化學(ICC)的方法檢測鬼筆環(huán)肽和β-Tublin以觀察子宮內(nèi)膜上皮細胞骨架的情況。結(jié)果：熒光素酶結(jié)果顯示,miRNA223與LIF之間的作用屬于直接作用關系。經(jīng)miRNA223前體克隆過表達干預后,miRNA223的表達水平顯著升高,而LIF蛋白的表達水平顯著下降。過表達干預后的HES、RL95-2細胞均表現(xiàn)出不同程度的細胞骨架受損,其中HES細胞的鬼筆環(huán)肽和β-Tublin表達水平均降低；而RL95-2細胞的鬼筆環(huán)肽表達水平下降,但是β-Tublin無顯著變化。結(jié)論：miRNA223可以直接作用于LIF并抑制LIF蛋白的表達,進而使子宮內(nèi)膜上皮細胞骨架受損。miRNA223通過LIF干擾子宮內(nèi)膜上皮細胞的細胞骨架,可能是導致子宮內(nèi)膜上皮細胞胞飲突形成受損的原因。
【圖文】：

華中科技大學博壬學位論文結(jié)果逡逑、X椛諍頭置謚釁諶俗庸諛ぷ櫓校恚椋遙危粒玻玻潮澩鎪降謀冉襄義喜捎茫遙裕校茫業(yè)姆椒ǘ勻俗覽諛ぷ櫓械模恚椋遙危粒玻玻辰屑觳�，分弥u釁謐幼櫓校恚椋遙危粒玻玻車謀澩鎪較災陀赬椛冢ㄔ薊常幢叮�，八０．０。（哇E保╁義希鈴危洛義襄五

本文編號：2669923