【摘要】：背景:體細胞重編程技術極大地促進了再生醫(yī)學研究的發(fā)展,包括核移植和細胞融合,還有獲得2012年諾貝爾獎的病毒載體介導的轉錄因子誘導重編程等方式,但是這些誘導方式存在著各種技術問題與潛在的安全問題,如操作方法復雜,誘導效率低,外源基因插入以及病毒重新激活等,這些都嚴重限制了體細胞重編程技術的進一步發(fā)展與應用。與上述體細胞重編程方法相比,小分子化合物誘導體細胞重編程擁有諸多優(yōu)勢,如原料容易合成與儲備,作用可逆,誘導可以標準化控制,應用更為安全等。小分子化合物誘導獲得的多能性干細胞(Chemically induced pluripotent stem cells,CiPS)可以避免病毒及轉錄因子給細胞帶來的安全問題,更有利于走向臨床的應用。目的:基于前期我們已經成功開發(fā)了一種操作簡便、誘導過程條件均勻、所有成分明確、標準化的小分子化合物誘導方法,驗證重編程起始細胞確為小鼠胚胎成纖維細胞(Mouse embryonic fibroblasts,MEFs),進一步研究小分子化合物重編程機制。方法:本研究使用轉基因小鼠構建FSP-tdTomato熒光蛋白追蹤的成纖維細胞進行小分子化合物誘導重編程,獲取了FSP-tdTomato的CiPS細胞系,并通過形態(tài)學分析,多能性基因mRNA、蛋白質的表達情況以及畸胎瘤實驗等對其多能性進行鑒定。結果:本實驗結果表明,小分子化合物處理tdTomato-MEFs 40天之后,出現(xiàn)核仁明顯、核質比高、細胞呈圓形、團塊狀聚集的細胞克隆,并且高表達多能性基因,體內可分化為三個胚層組織。結論:以上結果表明tdTomato-MEFs可用于小分子化合物重編程為CiPSCs,并且具有與小鼠胚胎干細胞(mouse embryonic stem cells,mESCs)類似的多能性。該熒光蛋白追蹤細胞系的建立將有利于小分子化合物重編程機制的進一步研究,并且該細胞系的進一步分化仍能保持熒光蛋白持續(xù)表達,可用于CiPSCs來源功能性細胞的移植追蹤等研究。
【圖文】：

華南理工大學碩士學位論文。若有腫瘤形成，將其剝離后用 4%多聚甲醛固定，送至廣州生物醫(yī)藥與理實驗室進行石蠟切片和 H&E 染色。嵌合體小鼠檢測鼠嵌合體是來源于兩個或兩個以上胚胎或個體的個體。1961 年，A.Tarkow胚胎的透明帶去除，聚集形成嵌合體，成功地制作了世界上第一只嵌合體，Garder 將囊胚細胞注射到囊胚腔，創(chuàng)建了囊胚注射法制作嵌合體。小鼠應用于研究胚胎和器官發(fā)育問題，分析復雜表型，傳遞 ES 細胞基因組（，獲得基因突變小鼠，或者判斷細胞系多能性和發(fā)育潛能。本實驗主要用多能性和發(fā)育潛能。技術流程如下：

圖 2-2 小鼠陰道栓實體圖鼠稱重后按 40-50 mg/kg 戊巴比妥鈉 75%酒精噴消毒小鼠腹部，再用棉球 1 cm 的橫切口，再在腹壁做一個同子輕輕夾住左側睪丸的脂肪墊并將其管在睪丸的下面，，有血管伴行，用燒心送回腹腔，重復以上步驟夾斷右側�？p合小鼠腹壁和皮膚。將小鼠放入公鼠與母鼠合籠檢測公鼠是否結扎成用結扎雄鼠與雌鼠交配，盡管雌鼠處于胚胎移植的接收轉態(tài)，而且假孕導產生用于囊胚子宮胚胎移植的假孕
【學位授予單位】：華南理工大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R329.2

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 林小春;;科學家讓小鼠“返老還童”[J];甘肅教育;2017年02期

2 ;復旦大學發(fā)現(xiàn)細胞重編程技術能促進內耳毛細胞增殖再生[J];生物學教學;2017年05期

3 ;我國揭示RNA結合蛋白DDX5在體細胞重編程中的關鍵作用[J];生物學教學;2017年07期

4 趙夢夢;謝玉才;;心肌細胞直接重編程的研究進展[J];國際心血管病雜志;2017年02期

5 Hui Zheng;Bo Huang;Bingjie Zhang;Yunlong Xiang;Zhenhai Du;Qianhua Xu;Yuanyuan Li;Qiujun Wang;Jing Ma;Xu Peng;Feng Xu;頡偉;;組蛋白修飾重編程重塑表觀記憶[J];科學新聞;2017年04期

6 鄧宏魁;;細胞重編程技術簡介[J];科技導報;2016年13期

7 夏文明;;細胞重編程的研究進展[J];新農業(yè);2014年23期

8 ;重編程:生物學的黑匣子[J];廈門科技;2015年01期

9 關波;;腦細胞“重編程”有望治療帕金森[J];老同志之友;2017年13期

10 趙阿曼;管興華;;回眸中國2013年細胞重編程研究[J];生命的化學;2014年02期

相關會議論文 前10條

1 潘傳英;藍賢勇;陳宏;Colin E Bishop;;利用特定因子誘導293T細胞的重編程研究[A];第十二次全國畜禽遺傳標記研討會論文集[C];2010年

2 李勁松;;細胞重編程和胚胎發(fā)育[A];細胞—生命的基礎——中國細胞生物學學會2013年全國學術大會·武漢論文摘要集[C];2013年

3 李勁松;;細胞重編程與胚胎發(fā)育[A];第二屆全國發(fā)育生物學大會論文集[C];2014年

4 李勁松;;細胞重編程與胚胎發(fā)育[A];第三屆“模式生物與人類健康”發(fā)育遺傳學全國學術研討會論文集[C];2014年

5 楊冠恒;張少清;伊慶福;曾凡一;;體細胞重編程對基因座位點控制區(qū)作用影響的研究[A];中華醫(yī)學會第十五次全國醫(yī)學遺傳學學術會議暨中國醫(yī)師協(xié)會醫(yī)學遺傳醫(yī)師分會第一屆全國學術會議暨2016年浙江省醫(yī)學遺傳學年會論文匯編[C];2016年

6 吳風瑞;劉勇;張迪;王榮;李文雍;;不同供體的克隆胚胎重編程過程中的轉錄組學分析[A];華東地區(qū)生物化學與分子生物學學會聯(lián)合會2017年學術交流會暨安徽省生物化學與分子生物學學會理事會議論文集[C];2017年

7 范宗興;余大為;郝海生;趙學明;王棟;劉巖;秦彤;朱化彬;杜衛(wèi)華;;爪蟾卵母細胞抽提物誘導體細胞重編程研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學會動物繁殖學分會第十六屆學術研討會論文集[C];2012年

8 周琪;;體細胞重編程,挑戰(zhàn)與希望[A];細胞—生命的基礎——中國細胞生物學學會2013年全國學術大會·武漢論文摘要集[C];2013年

9 王二耀;于洋;焦麗紅;王柳;周琪;;不同遺傳背景的小鼠卵母細胞去核后重編程能力的研究[A];第十屆全國生殖生物學學術研討會論文摘要集[C];2005年

10 楊柳;AL-KAL Abakar;蔣和生;;體細胞核移植技術中核重編程機制進展概述[A];中國畜牧獸醫(yī)學會動物繁殖學分會第十五屆學術研討會論文集（上冊）[C];2010年

相關重要報紙文章 前10條

1 記者 劉海英;細胞重編程讓小鼠“返老還童”[N];科技日報;2016年

2 記者 張建列 通訊員 黃博純;廣州生物院闡明抑制LSD1促細胞重編程機制[N];廣東科技報;2016年

3 記者 白毅;重編程中細胞重塑的關鍵因素被發(fā)現(xiàn)[N];中國醫(yī)藥報;2015年

4 本報記者 張佳星;突破式創(chuàng)新，中國開啟細胞重編程3.0時代[N];科技日報;2015年

5 記者 胡德榮;重編程異常細胞是“麻煩”制造者[N];健康報;2011年

6 譚薇　編譯;細胞重編程助力干細胞研發(fā)[N];第一財經日報;2009年

7 記者 喬地;我發(fā)現(xiàn)人類早期胚胎發(fā)育組蛋白重編程規(guī)律[N];科技日報;2019年

8 記者 常麗君;重編程干細胞或能預防輻射后癌變[N];科技日報;2015年

9 記者 朱漢斌 通訊員 苗瑋昱;中科院廣州生物院等揭示體細胞重編程起始分子機制[N];中國科學報;2019年

10 胡德榮;體細胞重編程研究有新發(fā)現(xiàn)[N];健康報;2004年

相關博士學位論文 前10條

1 譚宇婷;白血病發(fā)生的表觀遺傳機制及造血干細胞重編程研究[D];上海交通大學;2018年

2 孫樂萌;長鏈非編碼RNA Opbr6在體細胞重編程的中的作用及機制研究[D];吉林大學;2018年

3 賴曉鳳;代謝重編程促進ER陽性乳腺癌他莫昔芬耐藥的機制研究[D];中國人民解放軍空軍軍醫(yī)大學;2018年

4 杜忠華;Oct4互作lncRNA Osclr8對細胞重編程的作用及機制[D];吉林大學;2019年

5 張景龍;Etv5對細胞重編程和干細胞分化的調控機制[D];西北農林科技大學;2018年

6 成德;利用特定轉錄因子誘導豬體細胞重編程為多能干細胞的研究[D];西北農林科技大學;2012年

7 張文成;細胞重編程與誘導內胚層多能干細胞的獲取與鑒定[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院;2012年

8 高帥;連續(xù)誘導重編程體系的建立及多能性標志基因的鑒定[D];中國農業(yè)大學;2014年

9 孫志博;表觀遺傳重編程的骨髓間充質干細胞治療激素性股骨頭壞死的相關研究[D];華中科技大學;2014年

10 王術勇;小分子化合物介導譜系重編程獲取內胚層祖細胞及其相關機制研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院;2016年

相關碩士學位論文 前10條

1 令文慧;應用“間接譜系轉化”技術重編程小鼠胚胎成纖維細胞成為誘導性少突膠質細胞祖細胞的研究[D];西南大學;2019年

2 李繪宇;H3K27me3在SOX2重編程內皮細胞中的作用機制[D];吉林大學;2019年

3 楊文豪;PouV基因標記雞體細胞誘導重編程的研究[D];廣西大學;2019年

4 陳瑞平;小分子化合物誘導體細胞重編程熒光蛋白追蹤細胞系建立及鑒定分析[D];華南理工大學;2019年

5 遲大明;自噬對豬克隆早期胚胎中供體線粒體清除及重編程的影響初探[D];南京農業(yè)大學;2017年

6 張小敏;細胞重編程調控網(wǎng)絡的非線性隨機動力學研究[D];華中師范大學;2018年

7 姜霖;NG納米—蛋白復合體的構建及其重編程誘導骨髓間充質干細胞向心臟祖細胞分化的研究[D];南方醫(yī)科大學;2015年

8 賀海鵬;共濟失調-毛細血管擴張突變蛋白的抑制促進體細胞重編程為誘導多能干細胞[D];內蒙古大學;2018年

9 丁香香;豬組蛋白及其變體表達載體的構建及對豬體細胞重編程的影響[D];內蒙古大學;2018年

10 宋明民;利用單細胞克隆胚胎轉錄組挖掘體細胞重編程新的分子標記[D];內蒙古大學;2018年

本文編號：2665259