【摘要】：目的:肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae)是重要的引起醫(yī)源性感染的條件致病菌,可以引起肺炎等多種感染性疾病。本文旨在研究肺炎克雷伯菌的耐藥性及其播散的分子機(jī)理,這將對(duì)控制臨床肺炎克雷伯菌耐藥性產(chǎn)生、播散流行和指導(dǎo)臨床合理用藥具有重要意義。方法:利用新一代測(cè)序技術(shù)(HiSeq-2500和PacBioRS單分子實(shí)時(shí)測(cè)序平臺(tái))分析肺炎克雷伯菌KP1276基因組結(jié)構(gòu);利用比較基因組技術(shù),分析耐藥性質(zhì)粒、耐藥性基因相關(guān)可移動(dòng)遺傳元件的遺傳變異及進(jìn)化;利用分子克隆等方法克隆耐藥性相關(guān)基因,;通過(guò)瓊脂稀釋法檢測(cè)KP1276及耐藥性基因克隆株等對(duì)抗菌藥物的耐藥性(最低抑菌濃度);接合轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)和脈沖場(chǎng)電泳檢測(cè)耐藥性質(zhì)粒是否為接合轉(zhuǎn)移質(zhì)粒。結(jié)果:1.肺炎克雷伯菌KP1276基因組包括一個(gè)染色體和三個(gè)質(zhì)粒,染色體全長(zhǎng)為5.4Mb,編碼4998個(gè)基因,三個(gè)質(zhì)粒的大小分別約為228kb(pKP1276-228)、182kb(pKP1276-182)和 40kb(pKP1276-40),分別編碼 264、222和 59個(gè)基因。2.KP1276基因組編碼12個(gè)耐藥性相關(guān)基因,其中染色體編碼4個(gè)耐藥性基因(fosA、blaLEN、oqxA和oqxB),pKP1276-182編碼7個(gè)耐藥性基因(blaKLUC、blaCARB、aadA1、aadA2、cmlA1、dfrA1和sul2),pKP1276-40編碼 1 個(gè)耐藥性基因(aph(3')-Ia);并首次在肺炎克雷伯菌中發(fā)現(xiàn)blaKLUC和blaCARB基因。3.與NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)收集的基因組序列數(shù)據(jù)比較分析發(fā)現(xiàn),pKP1276-182與從不同種屬細(xì)菌分離到的8個(gè)質(zhì)粒(包括pIP1202,pP91278,pP99-018,R222,pVC1447,pSRC119-A/C和2個(gè)未命名的質(zhì)粒)DNA序列具有高度相似性。4.pKP1276-182為可接合轉(zhuǎn)移質(zhì)粒,該質(zhì)粒編碼的7個(gè)耐藥性基因都與轉(zhuǎn)座酶或整合酶一起,構(gòu)成轉(zhuǎn)座子或整合子,特別是發(fā)現(xiàn)pKP1276-182除攜帶2個(gè)轉(zhuǎn)座子和1個(gè)1型整合子外,還攜帶1個(gè)2型整合子,5.KP1276為多重耐藥性細(xì)菌,對(duì)β-內(nèi)酰胺類(lèi)、氨基糖苷類(lèi)和氯霉素類(lèi)等多種藥物耐藥;對(duì)部分耐藥性基因克隆與功能檢測(cè)顯示,blaLEN、blaCARB-2、blaKLUC、aadA2和cmlA1基因具有抗菌活性。結(jié)論:KP1276對(duì)β-內(nèi)酰胺類(lèi)、氨基糖苷類(lèi)和氯霉素類(lèi)藥物的抗性,與可接合轉(zhuǎn)移質(zhì)粒pKP1276-182編碼的耐藥性基因密切相關(guān);blaCARB和blaKLUC已在肺炎克雷伯菌中出現(xiàn),它們編碼于可接合轉(zhuǎn)移質(zhì)粒上,且都與可移動(dòng)遺傳元件相關(guān),由此可見(jiàn)肺炎克雷伯菌的耐藥性相關(guān)基因可以通過(guò)基因水平轉(zhuǎn)移在同種不同菌株或在不同種屬細(xì)菌中廣泛傳播,引起耐藥性播散,應(yīng)該引起臨床和社會(huì)的高度關(guān)注。
【圖文】：

得到完整的肺炎克雷伯菌ＫＰ１２７６的全基因組序列。ＫＰ１２７６的基因組除包含一個(gè)環(huán)逡逑狀染色體ＤＮＡ分子外，還有３個(gè)環(huán)狀質(zhì)粒ＤＮＡ分子。染色體全長(zhǎng)大小約為５．４邋Ｍｂ，逡逑包含４，９９８?jìng)�(gè)編碼序列（ｃｏｄｉｎｇ邋ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ，，邋ＣＤＳ）（圖２．２），三個(gè)質(zhì)粒的大小分別逡逑約為邋２２８ｋｂ邋（ｐＫＰ邋１２７６－２２８，圖２．３）、１８２ｋｂ邋（ｐＫＰ１２７６－１８２，圖邋２．４）和邋４０ｋｂ逡逑（ｐＫＰ１２７６－４０，圖２．５），分別編碼邋２６４、２２２和邋５９個(gè)基因（表２．８）。逡逑／／邐＾邋Ｖ逡逑■ｇ邋／邐／邋Ｘ邋５１００ｋｂｐ邐Ｘ．邋＇邐＼逡逑Ｓｍ邋＾邋／邋／邋４８00ｋｂＰ邐—ｐ邋＼＾逡逑ｉ§邋Ｉ＇邋（邋ｒ４５0°＾邐＾逡逑Ｈ邐（邋ｈ邐ＫＰ１２７６邐Ｈｉ邐ｎ逡逑■｜邐＾邋＾邋ｌ邋３９00ｋｂｐ邐５，４２９，６７４ｂｐ邐—叫！逡逑＼邋３６00Ｍ＞Ｐ邐１８００ｋｂｐ邋ｆ邋ｌ邋ｊ邋Ｈ逡逑Ｎ，邋３３００ｋｂｐ邐２１００ｋｂｐ邐／邐．邐＾邋金畫(huà)逡逑Ｊ’逡逑圖２．２肺炎克雷伯菌ＫＰ１２７６染色體圈圖逡逑由外向內(nèi)分別為：１，邋２，編碼于前導(dǎo)鏈和后隨鏈上的基因；３，邋ＧＣ含量；４，ＧＣ逡逑ｓｋｅｗ；邋５，座標(biāo)（ｋｂ）邋0逡逑１３逡逑

ｖ＊＊－？＊！邋＊邋ｆｃ邐％逡逑玲ｋ逡逑圖２．３肺炎克雷伯菌ＫＰｌ２７６質(zhì)粒ｐＫＰｌ２７６－２２８圈圖逡逑由外向內(nèi)分別為：１，編碼于前導(dǎo)鏈（順時(shí)針）和后隨鏈（逆時(shí)針）上的基因；逡逑２，ＧＣ含量；３，ＧＣｓｋｅｗ；邋４，座標(biāo)（ｋｂ）。逡逑／邐，邐／邋Ｚ，邐１。吻邐＼邐’、＼邐Ｖ＇逡逑Ｉ邐ｉ／ｒ邐Ａ、、；邐ｉ逡逑ｔ邐＾，．Ｕ邐１８２，４５０ｂｐ邐Ｈ／；邐Ｖ逡逑一＼邋＼邋＇邋＼，２ｏｗ邐＇邋ｊ邋Ｊ逡逑圖２．４肺炎克雷伯菌ＫＰ１２７６質(zhì)粒ｐＫＰ１２７６－１８２圈圖逡逑由外向內(nèi)分別為：１，編碼于前導(dǎo)鏈（順時(shí)針）和后隨鏈（逆時(shí)針）上的基因；逡逑２，ＧＣ含量；３，ＧＣｓｋｅｗ；邋４，座標(biāo)（ｋｂ）。逡逑１４逡逑
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類(lèi)號(hào)】：R378

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本文編號(hào)：2665218