本文關(guān)鍵詞：利用組學方法研究亞洲璃眼蜱唾液腺協(xié)助其高效吸血的分子機制，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：蜱是世界上僅次于蚊子的第二大吸血節(jié)肢動物。吸血過程中不但破壞宿主(包括人)皮膚組織造成多種病原體侵染,同時蜱類也是多種極其危險病原體的傳播媒介,如伯氏疏螺旋體、粒細胞無性體、斑疹傷寒等。因此對其研究具有重要的意義。雌蜱在吸血過程中身體會經(jīng)歷巨大的變化,特別是交配完成后,雌蜱體積會迅速增大數(shù)十倍,最終依靠大量的血液提供原料和能量來完成產(chǎn)卵活動,因此全面了解蜱類不同吸血期的標志性分子對于分析這一物種特殊的生活史具有重要的意義。除此之外蜱類的重要器官——唾液腺具有特殊的生理機能,可以促進蜱類在短時期內(nèi)大量吸血,因此解析唾液腺的分子機能對于全面了解并開展蜱類的綜合防治具有重要意義。本實驗首次采用高通量第二代測序技術(shù)(Illumina HiSeq2500)對饑餓期、交配前吸血期、交配后半飽期和飽血期的亞洲璃眼蜱進行了轉(zhuǎn)錄組測序,以期找到不同吸血期蜱類所表達的特殊基因,為全面了解蜱類吸血和交配過程中的生理機能奠定基礎(chǔ),同時該數(shù)據(jù)作為后期開展唾液腺的定量蛋白質(zhì)組研究的Database,為全面分析唾液腺的生理機能奠定基礎(chǔ)。測序結(jié)果共得到16.39 Gb Clean Data,各樣品Q30堿基百分比均不小于82.91%。將Clean Data中的Reads進行拼接組裝,共得到71586條Unigene。Unigene的N50為2109,預示著基因的組裝完整性較高。將這些Unigene與Nr、Uniprot、GO、COG、KOG、KEGG、Pfam七個數(shù)據(jù)庫分別進行BLAST比對,其中在Uniprot庫中注釋上相關(guān)功能的基因數(shù)為15414個,同時對差異基因進行GO分析,從“細胞組分”、“分子功能”和“代謝過程”三方面,來對亞洲璃眼蜱生長過程中出現(xiàn)的差異變化進行描述。最終將這些基因翻譯成相應(yīng)的氨基酸序列,作為定量蛋白質(zhì)組學研究的Database。通過計算Unigene的FPKM值尋找亞洲璃眼蜱體內(nèi)的表達基因,并比較同一Unigene在四個時期表達值的高低變化,共發(fā)現(xiàn)6448個在四個吸血時期均出現(xiàn)表達量變化的基因。同時利用iTRAQ定量蛋白質(zhì)組學方法對四個吸血時期的雌蜱唾液腺中所有蛋白質(zhì)進行了高通量定量研究,用114~117四標iTRAQ試劑分別標定四個吸血時期的雌蜱唾液腺蛋白,結(jié)果顯示在這四個時期表達量均出現(xiàn)變化的蛋白有617個。通過對結(jié)果中差異蛋白的分析,使得我們能夠更加全面的了解亞洲璃眼蜱唾液腺的生理機能,以及更深層次的調(diào)控機制和部分物質(zhì)的代謝規(guī)律,為研究和探尋蜱類的綜合防治提供了有力的理論支撐。
【關(guān)鍵詞】：亞洲璃眼蜱 轉(zhuǎn)錄組 定量蛋白質(zhì)組 iTRAQ
【學位授予單位】：河北師范大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R384.4
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-10
• 第一章 綜述10-16
• 1.1 蜱簡介10
• 1.2 應(yīng)用轉(zhuǎn)錄組和蛋白質(zhì)組技術(shù)開展蜱類分子方面的研究10-13
• 1.3 DNA測序技術(shù)及其發(fā)展13-14
• 1.4 蛋白質(zhì)測序技術(shù)及其發(fā)展14-16
• 第二章 亞洲璃眼蜱不同吸血期轉(zhuǎn)錄組測序與比較分析16-29
• 2.1 實驗材料16
• 2.1.1 實驗動物16
• 2.1.2 測序?qū)ο?/span>16
• 2.1.3 實驗試劑與耗材16
• 2.2 實驗儀器16
• 2.3 實驗方法及步驟16-18
• 2.3.1 RNA樣品檢測16-17
• 2.3.2 RNA文庫構(gòu)建17
• 2.3.3 文庫質(zhì)控17
• 2.3.4 測序17
• 2.3.5 測序數(shù)據(jù)質(zhì)控17
• 2.3.6 轉(zhuǎn)錄組測序數(shù)據(jù)組裝17
• 2.3.7 Unigene功能注釋17
• 2.3.8 基因表達量分析17-18
• 2.3.9 基因的差異表達分析18
• 2.3.10 差異表達基因功能注釋和富集分析18
• 2.4 實驗結(jié)果18-27
• 2.4.1 測序及組裝結(jié)果18-19
• 2.4.2 Unigene功能注釋19-20
• 2.4.3 差異表達基因篩選及聚類分析20-22
• 2.4.4 差異表達基因GO富集分析22-27
• 2.5 討論27-29
• 第三章 利用定量蛋白質(zhì)組學方法分析亞洲璃眼蜱不同吸血期唾液腺蛋白質(zhì)的表達情況及生物學功能分析29-47
• 3.1 實驗材料29
• 3.1.1 實驗動物29
• 3.1.2 實驗試劑與耗材29
• 3.2 實驗儀器29
• 3.3 實驗方法及步驟29-32
• 3.3.1 組織解剖和蛋白提取29-30
• 3.3.2 蛋白的酶解和i TRAQ標定30-31
• 3.3.3 蛋白樣品的高p H反相HPLC分離31-32
• 3.3.4 質(zhì)譜鑒定32
• 3.3.5 質(zhì)譜結(jié)果數(shù)據(jù)進行搜庫比對32
• 3.4 實驗結(jié)果32-41
• 3.4.1 蛋白的定量結(jié)果32-33
• 3.4.2 蛋白的聚類分析33-36
• 3.4.3 差異基因集GO分析36-41
• 3.5 討論41-47
• 參考文獻47-54
• 致謝54-55
• 攻讀學位期間取得的科研成果清單55

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本文編號：266426