發(fā)布時間：2020-05-12 04:32

【摘要】：(1)研究目的鼻咽癌是一種原發(fā)于鼻咽部的常見頭頸部惡性腫瘤,廣東等地區(qū)尤為高發(fā)。由于發(fā)病部位隱蔽,早期患者難以及時發(fā)現(xiàn),鼻咽部有大量的淋巴引流,所以大多數(shù)患者首先表現(xiàn)為頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。近幾十年來,雖然治療方法的不斷改進,但Ⅳ期患者5年生存率僅約65%。遠處轉(zhuǎn)移或個體異質(zhì)性耐藥的原因?qū)е卤茄拾┤杂屑s10%-20%的復發(fā)率。即使在同步放化療后,大部分T3或T4期患者的總生存率依舊相對較低。原發(fā)和繼發(fā)性的耐藥限制了治療藥物的選擇。然而,關(guān)于復發(fā)或者轉(zhuǎn)移性鼻咽癌具體是通過何種機制產(chǎn)生的耐藥目前仍然不是很清楚。因此,明確鼻咽癌的耐藥機制將有助于制定合適的治療方案,從而提高患者的生存率和改善生活質(zhì)量。(2)研究方法采用順鉑劑量逐步遞加法分別誘導鼻咽癌細胞HNE-1和CNE-2,建立了兩株鼻咽癌順鉑耐藥細胞系(HNE-1/DDP和CNE-2/DDP),通過皮下種瘤法建立了荷兩種瘤裸鼠模型,并通過細胞生物學的方法研究了耐藥細胞增殖、遷移、凋亡、克隆等生物學特征。在此基礎上分別對耐藥細胞系和親本細胞系進行了mRNA測序,并對測序結(jié)果進行了生物信息分析,篩選出幾個與順鉑耐藥高度相關(guān)的通路和基因。通過在親代細胞系中過表達,在耐藥細胞系中沉默顯著差異表達基因(DEGs),體內(nèi)外實驗進一步驗證了鼻咽癌順鉑耐藥發(fā)生高度相關(guān)的基因,并初步探討了其在耐藥形成機制中可能的作用。(3)研究結(jié)果成功誘導建立的鼻咽癌耐藥細胞株HNE-1/DDP和CNE-2/DDP對順鉑耐藥指數(shù)(RI)分別為12.02和16.02,細胞凋亡減少,但遷移、克隆、增殖等能力無明顯改變。HNE-1實驗組共發(fā)現(xiàn)15403組差異表達基因,其中948組表現(xiàn)出顯著差異(458組為過表達差異表達基因)。我們發(fā)現(xiàn)在所有顯著差異表達基因中有9組差異表達基因與經(jīng)典的鉑類耐藥通路相關(guān),其中有3組差異表達基因(ATM,IAP-1,IAP-2)也出現(xiàn)在本次研究的生信分析結(jié)果的前5大差異表達通路中。而其中IAP-1擁有最高的log2比值(log2比值,4.22;概率,0.95)。經(jīng)體外實驗驗證,耐藥細胞系中IAP-1表達升高引起順鉑在樣本中的半數(shù)致死量(IC50)升高,細胞凋亡減少,細胞增殖、克隆和遷移能力下降。此外體內(nèi)實驗證明高表達的IAP-1減緩了腫瘤生長速度,但也降低了腫瘤對順鉑的敏感性,減弱了藥物的療效。(4)研究結(jié)論體外和體內(nèi)實驗表明,表達升高的IAP-1在鼻咽癌順鉑耐藥中發(fā)揮重要作用,且其生物學功能的改變與臨床數(shù)據(jù)具有一致性。結(jié)合開放數(shù)據(jù)源的分析結(jié)果,表達升高的IAP-1與較差的5年存活率、更高的復發(fā)率和更高的腫瘤組織細胞分型相關(guān)�？傊�,IAP-1表達升高與順鉑化療反應較差和不良預后相關(guān),提示IAP-1可以作為一個新的鼻咽癌預后指標,并且可能是一個潛在的可以改善順鉑化療敏感性的治療靶點。
【圖文】：

逑９５％邋ＣＩ：－４１．４９邋ｔｏ－１３．１７）。此外，我們設計了一個劃痕實驗來檢測細胞的遷移能逡逑力，其差異結(jié)果顯示沒有顯著的統(tǒng)計學意義（圖３－１Ｆ，，Ｇ）（ＨＮＥ－ｌｖｓＨＮＥ－ｌ／ＤＤＰ逡逑Ｐ值＝０？１０（＞０．０５）；ＣＮＥ－２ｖｓＣＮＥ－２／ＤＤＰＰ值＝０．７０（＞０？０５））。逡逑綜上所述，與親代細胞系相比，耐藥的鼻咽癌細胞系凋亡率降低，對順鉑逡逑的ＩＣ５０值升高，其他生物學功能無顯著差異。我們想知道這兩株耐藥鼻咽癌細逡逑胞系在體內(nèi)的生物學功能變化是否與體外的一致或有差異，所以我們進行了下逡逑一步體內(nèi)實驗來加以驗證。逡逑表３－１不同鼻咽癌細胞耐藥指數(shù)逡逑ＩＣ５０／0ｉｇ／ｍｌ）邐耐藥指數(shù)邐ＩＣ５０／0ｉｇ／ｍｌ）邐耐藥指數(shù)逡逑藥物名稱邐ＨＮＥ－ｌ／Ｄ邋Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ邐ＣＮＥ－２／Ｄ邋Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ逡逑ＨＮＥ－１邐ＣＮＥ－２逡逑ＤＰ邐Ｉｎｄｅｘ，邋ＲＩ邐ＤＰ邐Ｉｎｄｅｘ，邋ＲＩ逡逑順鉑邐０．５９４邐７．０８邐１２．０２邐０．４５３邐２１．３４１邐１６．０２逡逑紫杉醇邐０．１６邐０．１６１邐１．０１邐０．０７９邐０．５２２邐６．６１逡逑五氟尿嘧啶邐０．５３９邐０．５５邐１．０２邐０．７２８邐０．９３３邐１．２８逡逑表３－２不同鼻咽癌細胞耐藥穩(wěn)定性逡逑ＩＣ５０／（ｎｇ／ｍｌ）邐耐藥指數(shù)邐ＩＣ５０／（ｆｉｇ／ｍｌ）逡逑邐邋邐邋耐藥指數(shù)逡逑時間點邐Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ逡逑ＨＮＥ－１邋ＨＮＥ－ｌ／ＤＤＰ邐ＣＮＥ－２邋ＣＮＥ－２／ＤＤＰ邋Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ邋Ｉｎｄｅｘ，邋ＲＩ逡逑Ｉｎｄｅｘ，邋ＲＩ逡逑建株

相似（Ｐ邋值＝０．１８７３邋（＞０．０５），邋９５％邋ＣＩ：邋－６０．００邋？１３．０９）（圖邋３－２Ｄ），差異無顯著統(tǒng)計學逡逑意義。這些結(jié)果說明即使在體內(nèi)，耐藥的鼻咽癌細胞系也表現(xiàn)出了較強的順鉑逡逑耐受性。如圖３－２所示，ＨＮＥ－１／ＤＤＰ細胞系在體內(nèi)雖然生長較緩慢，但其對順逡逑鉑的耐受性較強。兩組小鼠的體重變化在治療前后均無顯著差異（治療前Ｐ值逡逑＝０．２３１８邋（＞０．０５），９５％邋ＣＩ：邋－３．４１７邋？１．４８４；治療后邋Ｐ邋值二０．９４４７邋（＞０．０５），９５％邋ＣＩ：逡逑－１．７９８？１．８６４。上述結(jié)果表明，ＨＮＥ－１／ＤＤＰ細胞系在體內(nèi)對順鈾也表現(xiàn)出了較逡逑強的抵抗性。但鼻咽癌細胞對順鉑耐藥的具體發(fā)生機制我們?nèi)匀徊皇呛芮宄�。逡逑因此，我們下一步進行了一個高通量的測序分析來研究這個問題。逡逑２４逡逑
【學位授予單位】：南方醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R739.63;R-332

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3 ;鼻咽癌標志物臨床應用專家共識[J];中國癌癥防治雜志;2019年03期

4 黎騁;鄭裕明;郭俊宇;馬麗萍;陸愛英;湯敏中;吳惠惠;蔡永林;;鼻咽癌組織中多聚免疫球蛋白受體的表達及意義[J];山東醫(yī)藥;2015年46期

5 葉浩昕;范紹

本文編號：2659660