【摘要】：目的:探討GMAP210在小鼠精子發(fā)生過程中的作用,分析其對男性生殖能力的影響,為早期診斷和治療男性不育提供一定的科學依據(jù)。方法:將Gmap210~(flox/flox)雌性小鼠和stra8-iCre雄性小鼠雜交以獲得條件性敲除(KO)小鼠,以Stra8-iCre;Gmap210f~(lox/+)小鼠作為對照;Western Blot檢測野生型小鼠第一波精子發(fā)生過程中GMAP210蛋白的表達;將六周齡Gmap210基因條件敲除雄性小鼠和對照組雄性小鼠與野生型成年雌性小鼠交配兩個月,檢測其生育能力和繁殖能力;收集對照組和Gmap210基因條件敲除雄性小鼠附睪尾部的精子,光學顯微鏡下拍照并攝影,精子的形態(tài)、數(shù)量和精子活力;HE染色觀察對照組和Gmap210基因條件敲除雄性小鼠睪丸和附睪的精子在不同階段的形態(tài)變化;電子顯微鏡觀察對照組和Gmap210基因條件敲除雄性小鼠睪丸和附睪中的精子的超微結構;免疫熒光觀察對照組和Gmap210基因條件敲除雄性小鼠睪丸生精細胞中IFT20的定位,以及附睪精子中的頂體形態(tài)和線粒體分布。結果:GMAP210蛋白在肝臟和睪丸中大量表達,且在小鼠出生后睪丸組織內的第一波精子發(fā)生過程中,GMAP210蛋白在16天開始大量表達,第35天表達最高;Gmap210基因條件敲除雄性小鼠未見任何生長異常,并且都能活到成年;所有的對照小鼠是可育的,但50%的條件性Gmap210基因敲除小鼠不育,且可育的KO小鼠產仔數(shù)明顯下降;形態(tài)學結果顯示KO小鼠睪丸生精小管結構正常,但是附睪管腔內精子頭部異常呈圓形,尾部排列紊亂;光學顯微鏡下觀察KO小鼠精子尾部正常,但大部分精子的頭部形狀異常;電子顯微鏡下觀察到KO小鼠附睪精子頭部異常,以及軸絲缺失,雖然大部分精子尾巴正常,但一些精子尾部中段缺損;頂體信號幾乎在生精細胞和精子中消失,且線粒體高度集中在精子頭部,卻未在尾部中段觀察到特定信號;IFT20的在睪丸生精細胞中表達下降,并且在整個細胞質中都能檢測到IFT20的信號。結論:GMAP210對于頂體形成,正常線粒體鞘和雄性生育力是必需的,并且雄性生精細胞中的IFT20定位依賴于正常的GMAP210表達。
【學位授予單位】：武漢科技大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R698.2;R-332

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本文編號：2642934