【摘要】：背景及目的長期以來的研究表明調(diào)節(jié)性T細胞(Tregs)對于限制效應(yīng)T細胞(Teffs)的活性以及維持自身免疫耐受性都至關(guān)重要,體內(nèi)Tregs失衡和功能障礙會導(dǎo)致免疫介導(dǎo)的疾病和組織損傷。此外,Tregs也參與各種免疫治療的機制,從而減少致病性免疫反應(yīng)。然而,目前使用的抗炎藥物和免疫調(diào)節(jié)劑對Tregs的功能和穩(wěn)態(tài)的影響并不完全清楚。關(guān)于白細胞介素2(IL-2)和白細胞介素2受體(IL2R)的大量研究揭示了其通過影響Tregs的功能和穩(wěn)態(tài)來調(diào)節(jié)免疫耐受。Tregs功能的保存或增強已經(jīng)成為現(xiàn)代免疫治療策略的關(guān)鍵組成部分。體內(nèi)低劑量IL-2給藥已被證實在擴增Tregs中是安全有效的,也有研究表明糖皮質(zhì)激素可增強自身免疫病患者體內(nèi)Tregs細胞的擴增。然而,這些免疫調(diào)節(jié)藥物的共同作用對Tregs的直接影響仍然未知,在考慮到臨床疾病病因、發(fā)病機制和治療的復(fù)雜背景下,各種藥物之間的反應(yīng)、藥物對免疫功能的影響等都將是影響疾病的因素,都提示臨床應(yīng)更加謹(jǐn)慎地解決異常免疫功能和免疫反應(yīng)恢復(fù)的問題。本實驗通過單獨潑尼松龍以及潑尼松龍聯(lián)合IL-2預(yù)處理健康人外周血PBMC,對比Tregs、Th1、Th17細胞的細胞比率,觀察和分析糖皮質(zhì)激素和IL-2對Treg細胞、Th1/Th17細胞的影響,并且還進一步分析其對Treg細胞亞群的影響。方法取健康人外周血,經(jīng)處理獲得淋巴細胞,實驗分為潑尼松龍?zhí)幚斫M(GC組)、潑尼松龍+高劑量IL-2處理組(GC+IL-2hi組)、潑尼松龍+低劑量IL-2處理組(GC+IL-2low組)和陰性對照組(control組),處理4天后,按多色分析法進行染色,用流式細胞儀檢測并分析Treg(CD3+CD4+Foxp3+)細胞頻率、Th1(CD3+CD4+foxp3-IFNγ+IL17-)細胞頻率和Th17(CD3+CD4+foxp3-IL17+IFNγ-)細胞頻率變化,進一步對Treg細胞進行分群后各群細胞頻率的變化。結(jié)果1、Treg細胞頻率:發(fā)現(xiàn)較control組,GC組顯著降低(p0.001),GC+IL-2hi組、GC+IL-2low組顯著升高(p值分別為0.001、0.001);較GC組,GC+IL-2hi組與GC+IL-2low組顯著升高(p0.001),GC+IL-2hi組和GC+IL-2low組對比,IL-2low組高于IL-2hi組(p0.05)。2、Th1細胞頻率:與control組對比,GC組、GC+IL-2hi組和GC+IL-2low均顯著降低(p0.001);其它組對比結(jié)果無統(tǒng)計學(xué)意義。3、Th17細胞頻率:與control組對比,GC組、GC+IL-2hi組和GC+IL-2low均降低(p0.05);其它組對比結(jié)果無統(tǒng)計學(xué)意義。4、Treg細胞分群:(1)active Tregs群細胞頻率:與control組比較,GC組降低(p0.001),GC+IL-2hi組升高(p0.05),GC+IL-2low組顯著升高(p0.001);與GC組比較,GC+IL-2hi組和GC+IL-2low組均顯著增高(p0.001);GC+IL-2hi組和GC+IL-2low組之間比較,IL-2low組顯著高于IL-2hi組(p0.001)。(2)resting Tregs群細胞頻率:與control組比較,GC+IL-2hi組升高(p0.05);與GC組比較,GC+IL-2low組顯著降低(p0.001);GC+IL-2hi組和GC+IL-2low組之間比較,IL-2low組細胞頻率較IL-2hi組細胞頻率顯著降低(p0.001)。(3)non-Tregs群細胞頻率:與control組比較,GC組升高(p0.05),GC+IL-2hi組降低(p0.05),GC+IL-2low組顯著降低(p0.001);與GC組比較,GC+IL-2hi組和GC+IL-2low組均顯著降低(p0.001);GC+IL-2hi組和GC+IL-2low組之間比較,IL-2low組顯著低于IL-2hi組(p0.001)。5、CD25的平均熒光強度:與control組比較,GC+IL-2hi組和GC+IL-2low組均顯著升高(p0.001);與GC組對比,GC+IL-2hi組和GC+IL-2low組均顯著升高(p0.001)。6、CD39的平均熒光強度:與control組比較,GC組明顯降低(p0.001),GC+IL-2hi組和GC+IL-2low組均顯著升高(p0.001);與GC組對比,GC+IL-2hi組和GC+IL-2low組均顯著升高(p0.001)。結(jié)論1、潑尼松龍體外短期處理顯著抑制Treg細胞,主要抑制有免疫調(diào)節(jié)活性的active Treg群,并改變Th1/Th17與Treg細胞平衡。2、IL-2對于Treg細胞具有顯著的增殖效應(yīng),且可以逆轉(zhuǎn)由潑尼松龍導(dǎo)致的Treg細胞抑制效應(yīng)。
【圖文】：

各組的Tregs細胞比率示意圖

Th1、Th17 細胞特征性流式散點圖見圖1.2。經(jīng)過流式細胞儀分析細胞，，首先我們對比了四組的 Treg 細胞的頻率（見表2），發(fā)現(xiàn)較 control 組，GC 組的 foxp3+Treg 細胞頻率顯著降低（p<0.001），GC+IL-2hi 組、GC+IL-2low 組 foxp3+Treg 細胞頻率顯著升高（分別為 p=0.001，p=0.0001）；較 GC 組，GC+IL-2hi 組與 GC+IL-2low 組 Treg 細胞頻率顯著升高（p<0.001），差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義；IL-2 刺激組之間對比
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R392

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本文編號：2635568