【摘要】：肺炎克雷伯桿菌(klebsiella pneumoniae)屬于腸桿菌科,克雷伯氏菌屬,在健康人的呼吸道和腸道正常菌群中均可存在,一般情況下不致病,其發(fā)病與宿主的防御功能缺陷、菌群失調(diào)及多種誘發(fā)因素相關(guān)。肺炎克雷伯桿菌是一種條件致病菌,其易感人群主要包括新生兒、老年人、免疫低下宿主、糖尿病病人、腫瘤患者,當(dāng)機(jī)體的免疫力下降或者在創(chuàng)傷、手術(shù)等其他誘因下,極易引發(fā)細(xì)菌感染,從而出現(xiàn)一系列臨床癥狀。肺炎克雷伯桿菌易引起肺炎,還可以引起腦膜炎、肝膿腫、泌尿道感染、傷口感染。近年來(lái),隨著廣譜抗生素的濫用,肺炎克雷伯桿菌已經(jīng)對(duì)多種抗生素產(chǎn)生耐藥性,導(dǎo)致臨床抗生素治療失敗以及病情遷延不愈。噬菌體由于其生物學(xué)特性,成為治療感染的有效手段之一,現(xiàn)已廣泛應(yīng)用于多個(gè)領(lǐng)域。本實(shí)驗(yàn)以吉林大學(xué)第二醫(yī)院分離得到的多重耐藥肺炎克雷伯桿菌作為宿主菌,通過(guò)雙層瓊脂平板法從醫(yī)院污水中分離出裂解性噬菌體,命名為Kp-8329,并對(duì)其生物學(xué)特性做初步鑒定:(1)透射電鏡顯示,噬菌體Kp-8329為有尾噬菌體目、長(zhǎng)尾病毒科噬菌體,頭部直徑約45~50nm,有一條尾,直徑約130-140nm;(2)Kp-8329基因組為雙鏈DNA,基因組含有EcoR I,EcoRⅤ,Hind III,Nde I等酶切位點(diǎn);(3)Kp-8329的最佳感染復(fù)數(shù)(MOI)為0.01;(4)一步生長(zhǎng)曲線顯示,Kp-8329有15分鐘的潛伏期,爆發(fā)期持續(xù)15分鐘,爆發(fā)量為147PFU/cell;(5)在pH 5-12的范圍內(nèi)和60℃以下的溫度范圍內(nèi),Kp-8329依然有較高的活性和裂解率;(6)Kp-8329裂解率較高,19株肺炎克雷伯桿菌臨床分離株可高效裂解其中的12株,裂解率為63.16%。(7)基因組測(cè)序和全基因組序列分析表明,Kp-8329基因組長(zhǎng)度為46,907 bp,GC含量為46.90%,含有116個(gè)開(kāi)放閱讀框,其中32個(gè)可預(yù)測(cè)其功能�；贒NA聚合酶親緣關(guān)系進(jìn)化樹(shù)表明,噬菌體Kp-8329與大腸埃希菌屬噬菌體Escherichia phage vB EcoS Sa179lw在同一個(gè)分支上,有較近的進(jìn)化關(guān)系。噬菌體Kp-8329的全基因組序列已提交至GenBank,其登錄號(hào)為:MK327140.1。綜上所述,本研究篩選出一株肺炎克雷伯桿菌毒性噬菌體Kp-8329,其裂解率高、適應(yīng)性強(qiáng)。不攜帶毒力基因與耐藥基因,為研發(fā)噬菌體生物制劑,以用于治療臨床多重耐藥菌感染提供了新的思路。
【圖文】：

至溴酚藍(lán)超過(guò)分離膠下緣后斷電。（5）取出凝膠板沖洗，打開(kāi)玻璃板，切去目的區(qū)域的凝膠，再?zèng)_洗片刻后將其浸泡染液內(nèi) 30 分鐘。（6）將染過(guò)色的凝膠進(jìn)行脫色，放于脫色搖床上脫色，，期間定時(shí)更換容器內(nèi)脫色液至可見(jiàn)清晰不同顏色的蛋白條帶即可，拍照記錄結(jié)果。2.3 結(jié)果2.3.1 肺炎克雷伯桿菌噬菌體的分離純化及滴度測(cè)定以肺炎克雷伯桿菌 Kp-8329 為宿主菌，從吉大一院醫(yī)用廢水中分離得到一株裂解性菌體，將其命名為 Kp-8329。如圖 2.1 所示，噬斑呈圓形，直徑約 3~5mm，邊緣清晰，小均一，在噬斑周圍有一個(gè)半透明的暈環(huán)，寬度約 5mm，顯示出裂解性噬菌體的噬斑特征當(dāng)噬菌體濃低至一定程度時(shí)會(huì)出現(xiàn)單個(gè)噬斑。

第 2 章 肺炎克雷伯桿菌的分離鑒定及生物學(xué)特性es of Klebsiella pneumoniae bacteriophage increasing the dilution multiple of figure A電子顯微鏡觀察329 在透射電子顯微鏡下觀察，如圖 2.2 所成，頭部直徑約為 45-50nm，有一條尾約audovirales Order）、長(zhǎng)尾病毒科（Stylovir
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R378

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本文編號(hào)：2635159