【摘要】：諾如病毒(norovirus,NOV)是一種引起急性腸胃炎的病原體,其中的GII.4基因型的病毒株在全球性諾如病毒流行中占據(jù)著主導(dǎo)地位。近年來的研究表明,諾如病毒GII.4病毒株的主要衣殼蛋白VP1的突變是GII.4病毒株逃避免疫的重要因素�，F(xiàn)階段多數(shù)研究均以主要衣殼蛋白VP1為對象,而次要衣殼蛋白VP2的功能與變異機(jī)制尚不明確。本課題首先以近期流行株Den_Haag_2006b、New_Orleans_2009及Sydney_2012為主要研究對象,系統(tǒng)表達(dá)各個時期流行株VP1蛋白,并構(gòu)建特異性單克隆抗體,確定各個時期流行株實(shí)現(xiàn)免疫逃逸的關(guān)鍵氨基酸位點(diǎn)。這些結(jié)果進(jìn)一步闡明GII.4流行株逃避群體免疫而導(dǎo)致周期性大流行的分子機(jī)理,為新型疫苗與藥物的設(shè)計(jì)提供重要的理論基礎(chǔ)。另一方面,我們通過構(gòu)建真核細(xì)胞的表達(dá)體系,對VP1和VP2之間的相互作用進(jìn)行了研究。結(jié)果顯示,通過它們之間的相互作用,VP1能顯著促進(jìn)VP2的表達(dá),VP2也能顯著促進(jìn)VP1的表達(dá)。進(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn),單獨(dú)的VP1蛋白分散在整個細(xì)胞中,而VP2蛋白則具有核定位的功能。在VP1和VP2共同存在的情況下,VP1通過VP2的介導(dǎo),同樣也定位在了細(xì)胞核上。這些結(jié)果提示我們,VP2可能在功能和結(jié)構(gòu)上對VP1的功能和位置變化至關(guān)重要,在VP2的協(xié)同下,VP1可能通過影響細(xì)胞核下游轉(zhuǎn)錄信號和染色質(zhì)重構(gòu)而在影響細(xì)胞功能方面發(fā)揮關(guān)鍵作用。然后我們通過生物信息學(xué)手段對VP2蛋白序列進(jìn)行比對和預(yù)測,發(fā)現(xiàn)VP2蛋白存在核定位序列,并對預(yù)測得到的核定位序列進(jìn)行了驗(yàn)證,確定VP2蛋白的入核依賴核定位序列的作用。這些結(jié)果為諾如病毒的防治提供了新的思路,啟示我們可以通過阻斷VP1和VP2蛋白之間的相互作用或者阻斷VP2蛋白的入核過程來治療諾如病毒感染引起的急性腸胃炎。
【學(xué)位授予單位】：華東師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R373

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本文編號：2627264