發(fā)布時(shí)間：2020-04-14 05:46

【摘要】：【背景】HBV是我國(guó)當(dāng)前流行最為廣泛、危害性最嚴(yán)重的疾病之一。全國(guó)估計(jì)約1億人為慢性HBV感染,占全世界慢性HBV感染者的1/3。酒精性肝病(Alcoholic liver disease,ALD)是一種常見(jiàn)的慢性肝臟疾病,主要由長(zhǎng)期過(guò)量飲酒所致,其疾病譜包括酒精性脂肪性肝病(Alcoholic fatty liver disease),酒精性脂肪性肝炎(Alcoholic steatohepatitis,AH),以及AH相關(guān)的肝纖維化、酒精性肝硬化以及肝癌。近年來(lái),隨著人們飲食習(xí)慣的改變以及社會(huì)生活水平的進(jìn)步,我國(guó)酒精類飲料的產(chǎn)量及消耗快速增長(zhǎng),酒精性肝病的發(fā)病率亦逐年攀升。值得關(guān)注的是,我國(guó)已經(jīng)屬于飲酒人群逐年激增的HBV高發(fā)區(qū)。大部分酒精性肝病患者為酒精性脂肪肝,大部分乙型肝炎患者為無(wú)癥狀攜帶者,兩者均無(wú)明顯肝功能異常及臨床癥狀,若未行�？企w檢,難以發(fā)現(xiàn),因此“隱匿性”強(qiáng),較易為患者自身忽視。慢性飲酒合并HBV長(zhǎng)期共存的潛在危害性尚未能引起廣泛足夠重視,缺乏統(tǒng)計(jì)學(xué)數(shù)據(jù),尚缺乏其疾病作用機(jī)制研究。肝臟是機(jī)體重要的代謝器官,參與糖、脂、蛋白質(zhì)等重要物質(zhì)的代謝過(guò)程。膽固醇是維持機(jī)體生理功能的重要物質(zhì),其主要代謝過(guò)程也在肝臟中進(jìn)行。膽固醇代謝紊亂可導(dǎo)致多種疾病的發(fā)生,而酒精性脂肪肝合并HBV復(fù)制對(duì)膽固醇代謝的影響尚不明確。本文通過(guò)建立一種酒精性脂肪肝合并HBV復(fù)制的小鼠模型,探討其對(duì)膽固醇代謝的影響及可能的機(jī)制�！痉椒ā客ㄟ^(guò)高壓尾靜脈注射pGEM-4Z1.3HBV質(zhì)粒到周齡6周的雄性FVB/Ncrl小鼠體內(nèi),同時(shí)酒精飲食干預(yù)6周,建立酒精性脂肪肝合并HBV復(fù)制的小鼠模型。觀察小鼠體重動(dòng)態(tài)變化、肝臟組織學(xué)變化、血清乙肝e抗原(Hepatitis B e antigen,HBeAg)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(Alanine aminotransferase,ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(Aspartate aminotansferase,AST)、甘油三酯(Triglyceride,TG)的變化,同時(shí)檢測(cè)血清總膽固醇(Total cholesterol,TC)、高低密度脂蛋白以及肝臟膽固醇水平的改變,進(jìn)而分析膽固醇合成相關(guān)分子,例如固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白1(Sterol regulatory element-binding protein 1,SREBP-1)、固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白2(Sterol regulatory element-binding protein 2,SREBP-2)、3-羥基-3-甲基戊二酸還原酶(3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme A reductase,HMGCR)的變化情況,以及膽固醇攝取相關(guān)分子,如低密度脂蛋白受體(Low density lipoprotein receptor,LDLR)、枯草溶菌霉素轉(zhuǎn)化酶9(Proprotein convertase subtilisin/kexin type9)和膽固醇降解相關(guān)分子膽固醇7α羥化酶(Cholesterol 7 alpha-hydroxylase,CYP-7α)、固醇27羥化酶(Sterol 27-hydroxylase,CYP-27A1)以及膽固醇逆向轉(zhuǎn)運(yùn)及酯化水解通路的改變。同時(shí)構(gòu)建真核表達(dá)載體pCDH-HBx、pCDH-HBs以及pCDH-HBc(依次編碼乙肝病毒蛋白HBx、HBs和HBc),pCDH-HBx、pCDH-HBs、pCDH-HBc及pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP空載質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞,乙醇共刺激,檢測(cè)上述膽固醇代謝相關(guān)分子表達(dá)情況。【結(jié)果】該小鼠模型體現(xiàn)了肝內(nèi)HBV復(fù)制以及酒精性脂肪肝的病理特征。肝臟膽固醇水平在慢性飲酒合并HBV復(fù)制組中顯著增高。參與膽固醇合成的重要分子SREBP-2和HMGCR在合并組中顯著上調(diào),而負(fù)責(zé)清除血清中低密度脂蛋白的LDLR的表達(dá)被其抑制分子PCSK9的上調(diào)所抑制,其水平呈下調(diào)趨勢(shì)。參與膽固醇降解的關(guān)鍵酶CYP-7α的表達(dá)在合并組中也明顯減少。而慢性飲酒合并HBV持續(xù)復(fù)制對(duì)膽固醇的逆向轉(zhuǎn)運(yùn)及酯化水解無(wú)明顯影響。HepG2細(xì)胞中HBc蛋白過(guò)表達(dá)合并乙醇共刺激顯著上調(diào)SREBP-2和HMGCR水平,并且明顯抑制LDL的攝取及CYP-7α的表達(dá)�！窘Y(jié)論】慢性飲酒合并HBV復(fù)制導(dǎo)致膽固醇在肝臟的蓄積,包括通過(guò)上調(diào)SREBP-2和HMGCR的表達(dá)增強(qiáng)膽固醇的合成,抑制CYP-7α的表達(dá),減弱膽固醇的降解。同時(shí)上調(diào)PCSK9從而抑制LDLR的表達(dá),減少肝臟對(duì)低密度脂蛋白的攝取,導(dǎo)致血清LDL清除障礙。另外,HBc蛋白可能在其中發(fā)揮重要作用。
【圖文】：

小鼠血清HBeAg的表達(dá)水平

小鼠肝組織HBcAg的表達(dá)（免疫組織化學(xué)染色，，400×），→所示為HBcAg陽(yáng)性表達(dá)
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R575;R512.62;R-332

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前9條

1 Min Li;Qi Wang;Shun-Ai Liu;Jin-Qian Zhang;Wei Ju;Min Quan;Sheng-Hu Feng;Jin-Ling Dong;Ping Gao;Jun Cheng;;MicroRNA-185-5p mediates regulation of SREBP2 expression by hepatitis C virus core protein[J];World Journal of Gastroenterology;2015年15期

2 李娜;易學(xué)瑞;袁有成;張欣蕊;孔祥平;;酒精對(duì)C57背景HBV轉(zhuǎn)基因小鼠肝臟損傷的作用[J];華南國(guó)防醫(yī)學(xué)雜志;2013年04期

3 Ying-Ju Li;Ping Zhu;Yu Liang;Wei-Guo Yin;Jian-Hua Xiao;;Hepatitis B virus induces expression of cholesterol metabolism-related genes via TLR2 in HepG2 cells[J];World Journal of Gastroenterology;2013年14期

4 郭峗婧;曹進(jìn);;ABCA1和ABCG1在膽固醇逆轉(zhuǎn)運(yùn)中作用的研究進(jìn)展[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(醫(yī)學(xué)地理分冊(cè));2012年03期

5 王瑞;羅俊生;關(guān)寧;霍小川;;膽固醇酯水解酶與缺血性腦血管病的關(guān)系[J];解剖科學(xué)進(jìn)展;2010年04期

6 Sebastian Mueller;Gunda Millonig;Helmut K Seitz;;Alcoholic liver disease and hepatitis C:A frequently underestimated combination[J];World Journal of Gastroenterology;2009年28期

7 孟曉丹;向國(guó)卿;賀小虎;王炳元;;肝硬化病因及臨床特點(diǎn)分析178例[J];世界華人消化雜志;2008年17期

8 沈振斌;秦新裕;童賽雄;鎖濤;;ABCG5和ABCG8在肝細(xì)胞膽固醇轉(zhuǎn)運(yùn)中的作用[J];中華肝膽外科雜志;2005年10期

9 ;Maintaining cholesterol homeostasis: Sterol regulatory element-binding proteins[J];World Journal of Gastroenterology;2004年21期

本文編號(hào)：2626954