【摘要】：目的:分析低溫刺激對脂肪細(xì)胞基因表達(dá)的影響,探討低溫刺激下脂肪細(xì)胞功能改變對臨近組織與器官產(chǎn)生的影響。方法:從SD大鼠腹股溝皮下脂肪組織中成功分離培養(yǎng)原代脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞。原代ADSCs傳代培養(yǎng)到第三代時開始成脂誘導(dǎo)培養(yǎng)13天,已分化好的脂肪細(xì)胞經(jīng)油紅O染色鑒定后,分為37℃對照組(C組)、30℃(D1組)、20℃(D2組)和10℃(D3組)四組。四組脂肪細(xì)胞放在不同溫度組下培養(yǎng)8小時后,提取各組脂肪細(xì)胞RNA進(jìn)行RNA-Seq檢測,通過DEGseq R語言包處理數(shù)據(jù)獲得差異表達(dá)基因。隨機(jī)選取6個差異表達(dá)基因通過qRT-PCR實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證測序數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。利用KOBAS3.0軟件,STRING數(shù)據(jù)庫和Cytoscape3.5.0軟件對差異表達(dá)基因進(jìn)行GO基因功能富集分析,KEGG生物通路富集分析和蛋白網(wǎng)網(wǎng)絡(luò)互作分析。結(jié)果:ADSCs成功分化誘導(dǎo)成脂肪細(xì)胞。測序分析結(jié)果顯示CD1組有55個差異表達(dá)基因其中35個上調(diào),20個下調(diào)。CD2組有121個差異表達(dá)基因其中76個上調(diào),45個下調(diào).CD3組有92個差異表達(dá)基因其中64個上調(diào),28個下調(diào)。GO基因功能富集分析顯示差異基因功能主要富集在生物過程中與氧化應(yīng)激,血管生成的及免疫反應(yīng)有關(guān)。KEGG生物通路富集分析顯示,差異表達(dá)基因主要富集的通路為PI3K-Akt信號通路,p53信號通路,致心律失常性右心室心肌病,TNF信號通路,糖尿病并發(fā)癥中的AGERAGE信號通路,MAPK信號通路和礦物質(zhì)吸收等。差異表達(dá)基因與糖尿病,心肌疾病和炎癥反應(yīng)存在一定聯(lián)系。蛋白互作網(wǎng)絡(luò)分析得出C組與D1,D2,D3組間關(guān)鍵性差異基因?yàn)镕os,Serpine1,Egr1,Cyr61,Gstp1,Rhob,Maoa,Nr4a1,Myc,Csf1和Junb。這些基因主要在細(xì)胞增殖,神經(jīng)變性和血管再生方面起主要作用。結(jié)論:低溫刺激下,脂肪細(xì)胞存在差異基因的表達(dá)。差異表達(dá)基因的功能主要富集于細(xì)胞增殖,免疫炎癥,血管生成,神經(jīng)病變等方面。低溫刺激下脂肪細(xì)胞分泌功能的改變對脂肪及臨近組織器官功能產(chǎn)生一定影響,為脂肪周圍組織與器官相關(guān)疾病的發(fā)病原因提供新研究方向。
【圖文】：

圖 1. ADSCs 在成脂誘導(dǎo)過程中有代表性的實(shí)例圖和誘導(dǎo)分化成功的脂肪細(xì)胞油紅A：第三代 ADSCs 誘導(dǎo)分化前細(xì)胞形態(tài)。B 和 C：成脂誘導(dǎo)培養(yǎng) 13 天，，ADSCs 成功胞時的細(xì)胞形態(tài)。D：ADSCs 成脂誘導(dǎo)培養(yǎng) 13 天后油紅 O 染色，紅色的是脂

圖 1. ADSCs 在成脂誘導(dǎo)過程中有代表性的實(shí)例圖和誘導(dǎo)分化成功的脂肪細(xì)胞油紅 O 染色圖。A：第三代 ADSCs 誘導(dǎo)分化前細(xì)胞形態(tài)。B 和 C：成脂誘導(dǎo)培養(yǎng) 13 天，ADSCs 成功分化成脂肪細(xì)胞時的細(xì)胞形態(tài)。D：ADSCs 成脂誘導(dǎo)培養(yǎng) 13 天后油紅 O 染色，紅色的是脂滴。
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R329.2

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本文編號：2625477