【摘要】：甲基苯丙胺((+)-methamphetamine,METH)濫用已成為一個(gè)全球公共衛(wèi)生問題,造成重大的疾病及經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。目前沒有批準(zhǔn)可用于治療METH濫用的藥物,疫苗為治療METH提供了一個(gè)新的策略。首先,為了建立一種合適的酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)方法檢測(cè)抗METH抗體,本研究第一部分先合成METH半抗原,再將METH半抗原分別與破傷風(fēng)類毒素(TT)和牛血清白蛋白(BSA)偶聯(lián),成功制備METH免疫抗原TT-METH與包被抗原BSA-METH,偶聯(lián)率分別為73:1及20:1。然后將TT-METH偶聯(lián)疫苗免疫小鼠,制備抗血清。利用BSA-METH包被酶標(biāo)板檢測(cè)抗METH抗體,進(jìn)行ELISA條件的摸索優(yōu)化,最佳包被緩沖液為PBS,包被蛋白濃度為2 μg/ml,包被條件為37℃2h后4℃過夜;最佳封閉液為5%脫脂奶粉,封閉條件為37℃2h;最適的酶標(biāo)抗體濃度為1:3000(1.33μg/ml),37℃孵育1h;底物最佳顯色時(shí)間為15min。實(shí)驗(yàn)批內(nèi)變異系數(shù)及批間變異系數(shù)均在5%以內(nèi),重復(fù)性較好。包被抗原不與TT免疫小鼠后的血清發(fā)生反應(yīng)且抗TT-METH的血清不與BSA發(fā)生反應(yīng),特異性較好。其次,為了建立簡(jiǎn)便的體內(nèi)生物材料中METH的液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用(LC/MS)檢測(cè)分析方法以研究疫苗對(duì)METH體內(nèi)分布的改變,本研究第二部分首先進(jìn)行了生物材料中METH不同提取方法的比較,提取率較高的為甲醇結(jié)合超聲提取。然后對(duì)所建立的方法進(jìn)行評(píng)價(jià),所建立的方法專屬性好,在10-2000ng/ml的范圍內(nèi)的線性良好,相關(guān)系數(shù)(r2)在0.9995-0.9999之間,回收率在96%-102.12%之間,精密度良好,變異系數(shù)(CV)5.72%,處理后的樣品穩(wěn)定性較好。最后利用建立的LC/MS分析方法研究了不同劑量的METH在小鼠體內(nèi)的血腦分布。研究顯示0.5-4 mg/kg劑量下血液及腦組織中METH的濃度均在15 min時(shí)最高,隨后逐漸遞減。不同時(shí)間點(diǎn)血液及腦組織中的濃度均具有劑量依賴關(guān)系,血液中的METH含量與腦組織中的METH含量在劑量為0.5-4 mg/kg范圍內(nèi)呈線性依賴關(guān)系。最后,我們開發(fā)了一種新型的油包水型納米乳佐劑(命名為NES01)用于TT-METH疫苗中。NES01平均粒徑為62.9 nm,多分散系數(shù)為0.146,顆粒分布均勻。NES01穩(wěn)定性較好。將NES01佐劑聯(lián)合TT-METH免疫小鼠具有良好的安全性,能夠有效增強(qiáng)TT-METH疫苗的抗體水平,顯示出較好的佐劑效果。綜上所述,本研究成功合成METH抗原TT-METH及BSA-METH,并建立了抗METH抗體的ELISA檢測(cè)方法;建立了小鼠體內(nèi)METH的LC/MS檢測(cè)方法。開發(fā)一種新型納米乳佐劑NES01,具有較好的佐劑效果,可作為METH疫苗的一種候選佐劑。
【圖文】：

對(duì)藥物結(jié)構(gòu)進(jìn)行修飾，給藥物加上一段連接臂，得到半抗原；半抗原的連接臂可與逡逑大分子載體蛋白進(jìn)行生物結(jié)合形成免疫偶聯(lián)化合物，將其與佐劑配伍注入機(jī)體后，逡逑免疫系統(tǒng)能夠識(shí)別并誘發(fā)抗ＭＥＴＨ半抗原的特異性抗體（見下一頁圖１，ＢｒｅｍｅｒＰＴ逡逑和邋Ｊａｎｄａ邋ＫＤ邋２０１７邋年在邋Ｃｏｎｊｕｇａｔｅ邋Ｖａｃｃｉｎｅ邋Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ邋ｆｏｒ邋Ｓｕｂｓｔａｎｃｅ邋Ｕｓｅ邋Ｄｉｓｏｒｄｅｒ逡逑一文中所作）［５８］。逡逑當(dāng)ＭＥＴＨ進(jìn)入機(jī)體，抗體可與ＭＥＴＨ結(jié)合，在循環(huán)系統(tǒng)內(nèi)形成抗體－ＭＥＴＨ復(fù)逡逑合物，形成的復(fù)合物分子量大以至于無法穿過血腦屏障，因此，會(huì)降低ＭＥＴＨ進(jìn)入逡逑大腦的速率和數(shù)量，，從而阻止或減少目標(biāo)藥物作用于大腦中的受體［５８］；然后抗體結(jié)逡逑合的藥物再在平衡狀態(tài)下從與抗體結(jié)合緩慢釋放作為殘留的游離藥物被代謝和消逡逑除。降低ＭＥＴＨ進(jìn)入大腦的速率和數(shù)量應(yīng)該減弱其引起的行為效應(yīng)，包括獎(jiǎng)賞效逡逑應(yīng)。研究顯示血液中的抗ＭＥＴＨ抗體通過減少和減慢ＭＥＴＨ進(jìn)入血腦屏障［５１，５２］，逡逑阻斷由ＭＥＴＨ誘導(dǎo)的自發(fā)活動(dòng)、體溫調(diào)節(jié)和精神運(yùn)動(dòng)ｆ％，并抑制其自我給藥［５４］。逡逑７逡逑

以二氯甲烷：丙酮：乙酸＝３０：邋１０：邋１的比例作為展開劑對(duì)ＭＥＴＨ及合成的逡逑ＭＥＴＨ進(jìn)行ＴＣＬ檢測(cè)，樣品不同組分由于移動(dòng)速度不同而彼此分離。展開后的薄逡逑層板經(jīng)過干燥后，用紫外燈照射檢出斑點(diǎn)，結(jié)果如圖１．１。展開分離后，化合物在薄逡逑層板上的位置用比移值（７？／值）來表示：ＭＥＴＨ的比移值b6原點(diǎn)至斑點(diǎn)中心距離逡逑／原點(diǎn)至展開劑前沿距離：／？／＝７．７／９．０＝０．８６；邋ＭＥＴＨ半抗原的比移值b6原點(diǎn)至斑點(diǎn)逡逑中心距離／原點(diǎn)至展開劑前沿距離：５／９．０＝０．５６。由展開ＴＣＬ圖及及／值可知，合逡逑成的產(chǎn)物中無起始原料ＭＥＴＨ，即ＭＥＴＨ全部參與了反應(yīng)。逡逑ＭＥＴＨ邐逡逑ＭＥＴＨ邋半抗原邐逡逑１邋２逡逑圖１．１邋ＭＥＴＨ半抗原ＴＣＬ檢測(cè)１－ＭＥＴＨ，２－ＭＥＴＨ半抗原逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋１．１邋ＴＬＣ邋ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ邋ｏｆ邋ＭＥＴＨ邋ｈａｐｔｅｎ邋１邋－ＭＥＴＨ，邋２－ＭＥＴＨ邋ｈａｐｔｅｎ逡逑３．１．２邐ＭＥＴＨ的核磁表征逡逑以ＴＭＳ作為內(nèi)標(biāo)對(duì)于合成的ＭＥＴＨ進(jìn)行１Ｈ核磁譜圖表征，結(jié)果見下一頁圖逡逑１．２，從核磁譜圖中，化合物ＭＥＴＨ的苯環(huán)的化學(xué)位移７－７．５ｐｐｍ處找到
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R392-33

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 王德康;;豬常用疫苗的使用方法[J];青海農(nóng)牧業(yè);2008年04期

2 王艷慧;;基層動(dòng)物防疫疫苗的管理及相關(guān)問題思考[J];飼料博覽;2019年02期

3 張芳;李玉;;小兒二類疫苗接種現(xiàn)狀調(diào)查及其相關(guān)影響因素分析[J];南昌大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2019年01期

4 瑪依努爾·阿不都克力木;梁靜;王培生;陳保林;尹鈺;;烏魯木齊市2012—2016年兒童入托入學(xué)預(yù)防接種查驗(yàn)情況[J];中國(guó)學(xué)校衛(wèi)生;2017年09期

5 陳曉曉;;兒童疫苗接種的問題分析[J];科技風(fēng);2017年26期

6 楊媛;;流動(dòng)兒童疫苗接種的及時(shí)率的影響因素分析[J];世界最新醫(yī)學(xué)信息文摘;2018年17期

7 林玲;秦夢(mèng)怡;胡曉江;;高校場(chǎng)域?qū)W(xué)生疫苗接種的影響[J];南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)(社會(huì)科學(xué)版);2018年03期

8 錢文昌;劉淑兵;王正奎;;淺議疫苗[J];中學(xué)生物學(xué);2017年12期

9 程宇航;陳寧;;國(guó)外一些國(guó)家對(duì)疫苗是怎樣進(jìn)行監(jiān)管的[J];老區(qū)建設(shè);2018年15期

10 吳科穎;;兒童流感疫苗接種干預(yù)在疾病預(yù)防中的應(yīng)用價(jià)值研究[J];世界最新醫(yī)學(xué)信息文摘;2016年79期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 朱珊;方宇;常捷;余家樂;張愉;計(jì)文婧;楊世民;;西安市家長(zhǎng)對(duì)兒童疫苗接種信心及影響因素調(diào)查[A];2018年中國(guó)藥學(xué)會(huì)藥事管理專業(yè)委員會(huì)年會(huì)暨學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2018年

2 ;疫苗守護(hù)生命 第三章 疫苗的能與不能 第一節(jié) 接種疫苗安全有效[A];科技民生報(bào)告叢書——疫苗守護(hù)生命[C];2018年

3 ;疫苗守護(hù)生命 附錄 疫苗接種之“你問我答” 第一問 疫苗問答之“接種疫苗,你知道嗎?”[A];科技民生報(bào)告叢書——疫苗守護(hù)生命[C];2018年

4 楊錫強(qiáng);;疫苗接種的不良反應(yīng)及其處理[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十五次全國(guó)兒科學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編（上冊(cè)）[C];2010年

5 萬朝敏;;疫苗接種在流感大流行群體防控中的作用[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十五次全國(guó)兒科學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編（上冊(cè)）[C];2010年

6 劉柏林;熊亞軍;唐有智;唐孝富;;合川區(qū)適齡兒童卡介疫苗接種成功率調(diào)查分析[A];重慶市預(yù)防醫(yī)學(xué)會(huì)2012年學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2012年

7 ;疫苗守護(hù)生命 附錄 疫苗接種之“你問我答” 第四問 疫苗問答之“關(guān)愛特殊疾病人群”[A];科技民生報(bào)告叢書——疫苗守護(hù)生命[C];2018年

8 ;疫苗守護(hù)生命 附錄 疫苗接種之“你問我答” 第五問 疫苗問答之“世界這么大,你想去哪兒看看”[A];科技民生報(bào)告叢書——疫苗守護(hù)生命[C];2018年

9 陳賢希;陳波;;疫苗藥品管理與應(yīng)用存在的問題及對(duì)策[A];2013年“全國(guó)醫(yī)院藥學(xué)（藥學(xué)服務(wù)與實(shí)踐）學(xué)術(shù)會(huì)議”論文集[C];2013年

10 ;疫苗守護(hù)生命 第一章 免疫系統(tǒng)守護(hù)人類健康 第三節(jié) 接種疫苗的歷史[A];科技民生報(bào)告叢書——疫苗守護(hù)生命[C];2018年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 湖南省兒童醫(yī)院兒童保健所副主任醫(yī)師 徐寧安;特殊時(shí)期 錯(cuò)過疫苗接種怎么辦[N];健康報(bào);2020年

2 本報(bào)記者 李喬宇;海爾生物首次直播即成網(wǎng)紅 全國(guó)首個(gè)智能化疫苗接種場(chǎng)景現(xiàn)身[N];證券日?qǐng)?bào);2020年

3 記者 車喜韻;陜西首個(gè)成人疫苗接種門診開診[N];陜西日?qǐng)?bào);2020年

4 記者 邱勝;貴州實(shí)現(xiàn)疫苗信息全程追溯[N];法制生活報(bào);2020年

5 本報(bào)記者 吳佳佳;這支疫苗“靠譜”嗎？在貴州，掃一掃就知道[N];經(jīng)濟(jì)日?qǐng)?bào);2020年

6 本報(bào)通訊員 蔣尚飛 顧敏;督促職能部門堵塞疫苗接種管理漏洞[N];中國(guó)紀(jì)檢監(jiān)察報(bào);2019年

7 本報(bào)記者 郝海軍;疫苗有“身份” 接種更安全[N];臨汾日?qǐng)?bào);2019年

8 記者 楊燕;內(nèi)蒙古改革和完善疫苗管理體制[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2019年

9 記者 洪捷 通訊員 徐兆鴻;《疫苗管理法》本月起施行 我市已實(shí)現(xiàn)疫苗全程追溯[N];益陽日?qǐng)?bào);2019年

10 徐非;全面落實(shí)疫苗管理法的制度要求(上)[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2020年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 康爽;HBV疫苗在HIV感染者中的有效性及免疫應(yīng)答研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2019年

2 于光婕;異源DRibble疫苗誘導(dǎo)抗腫瘤免疫作用的增強(qiáng)策略及其機(jī)制的探討[D];東南大學(xué);2017年

3 潘雅杰;抗PCSK9治療性短肽疫苗的研究[D];華中科技大學(xué);2018年

4 王海剛;CS-γ-PGA納米凝膠在HBV疫苗中的應(yīng)用研究[D];山東大學(xué);2019年

5 倪敬軒;中藥疫苗稀釋劑提高豬偽狂犬和豬瘟弱毒疫苗的免疫效果研究[D];浙江大學(xué);2017年

6 師長(zhǎng)宏;融合表達(dá)Ag85B-ESAT6的結(jié)核病疫苗的構(gòu)建及其免疫學(xué)特性研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2004年

7 賈榮;靶向防齲DNA疫苗增強(qiáng)免疫效果與機(jī)制研究[D];武漢大學(xué);2004年

8 朱中元;結(jié)核DNA疫苗的構(gòu)建、免疫功能及保護(hù)效果研究[D];華南熱帶農(nóng)業(yè)大學(xué);2004年

9 張海;融合表達(dá)ESAT6-CFP10結(jié)核病疫苗的構(gòu)建及其免疫學(xué)特性研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2005年

10 何曉文;乙型肝炎治療性疫苗的研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2005年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 富詩嵐;中國(guó)大陸人群對(duì)人乳頭狀瘤病毒預(yù)防性疫苗的認(rèn)知和態(tài)度[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2019年

2 朱U

本文編號(hào)：2618180