【摘要】：研究背景人巨細(xì)胞病毒(Human cytomegalovirus,HCMV)是皰疹病毒家族的重要組成成員之一,可導(dǎo)致先天性腦組織發(fā)育障礙及免疫缺陷人群的腦功能損害。先天性HCMV感染可導(dǎo)致智力低下,視神經(jīng)萎縮,癲癇等多種中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病。在免疫功能低下人群中,HCMV感染可引起HCMV相關(guān)性腦炎或腦病,造成極高的致殘或致死率。腦組織是HCMV感染的主要靶器官之一,在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中HCMV優(yōu)先感染神經(jīng)元細(xì)胞,然而關(guān)于其在神經(jīng)細(xì)胞中復(fù)制過程的機(jī)制研究甚少。因此,了解HCMV在神經(jīng)細(xì)胞中的復(fù)制機(jī)制或?qū)︻A(yù)防HCMV所致的神經(jīng)系統(tǒng)疾病具有重要意義。MicroRNAs(MiRNAs)是一類非編碼的小分子RNA,其長度通常約為21-25個(gè)核苷酸,可參與調(diào)控多種病毒的感染過程。在登革熱病毒感染宿主細(xì)胞時(shí),miR-146可通過靶向TRAF6來抑制干擾素的表達(dá),以促進(jìn)登革熱病毒在宿主細(xì)胞內(nèi)的復(fù)制。流感病毒可導(dǎo)致miR-146a和miR-155的異常表達(dá),從而抑制宿主細(xì)胞內(nèi)Ⅰ型干擾素(IFN)應(yīng)答。研究發(fā)現(xiàn)miRNA-138可參與調(diào)控HCMV在內(nèi)皮細(xì)胞的復(fù)制過程,然而關(guān)于miRNAs對HCMV感染神經(jīng)細(xì)胞的調(diào)控研究相對較少,這引起了我們極大的研究興趣。免疫調(diào)節(jié)在HCMV感染宿主細(xì)胞過程中發(fā)揮至關(guān)重要的作用。在免疫功能正常人群中,免疫系統(tǒng)可抑制HCMV在宿主細(xì)胞內(nèi)的復(fù)制。而在免疫系統(tǒng)尚未發(fā)育成熟或免疫功能缺陷人群中,免疫系統(tǒng)并不能有效抑制HCMV的感染過程。此外,HCMV還可誘發(fā)機(jī)體產(chǎn)生免疫逃逸機(jī)制,在宿主體內(nèi)長期隱匿存在,當(dāng)機(jī)體免疫力下降時(shí),病毒可在宿主細(xì)胞內(nèi)大量復(fù)制。由此表明免疫系統(tǒng)參與調(diào)控HCMV在宿主細(xì)胞內(nèi)復(fù)制過程。因此,我們推測miRNAs或可通過調(diào)控機(jī)體免疫應(yīng)答反應(yīng)激活HCMV在神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)復(fù)制過程。研究目的1篩選HCMV感染宿主在神經(jīng)細(xì)胞前后差異表達(dá)顯著的microRNAs;2研究miR-182在神經(jīng)細(xì)胞上對HCMV復(fù)制的影響;3鑒定miR-182作用的靶基因;4分析miR-182在神經(jīng)細(xì)胞上調(diào)控HCMV復(fù)制的分子機(jī)制。研究內(nèi)容1 microRNA芯片篩選以及miR-182的水平檢測;2 miR-182對干擾素免疫應(yīng)答及HCMV復(fù)制的調(diào)控;3 miR-182的靶基因預(yù)測鑒定及其對miR-182調(diào)控干擾素免疫應(yīng)答及HCMV復(fù)制的干預(yù)作用;4動(dòng)物模型中miR-182 agomir對HCMV病毒復(fù)制的影響。研究方法1通過分析HCMV感染宿主細(xì)胞前后microRNA芯片數(shù)據(jù)(數(shù)據(jù)來源GEO數(shù)據(jù)庫,Accession:GSE33584和GSE75305),挑選上調(diào),下調(diào)最明顯的8條microRNA驗(yàn)證;2 U-251MG,NPCs兩株神經(jīng)細(xì)胞在不同感染時(shí)間,不同感染濃度對miR-182水平的影響;3在U-251MG,NPCs兩株神經(jīng)細(xì)胞中過表達(dá)或者干擾miR-182后,檢測HCMV拷貝數(shù),病毒滴度以及病毒的兩個(gè)關(guān)鍵蛋白(IE2與pp65)的表達(dá);4在U-251MG,NPCs兩株神經(jīng)細(xì)胞中過表達(dá)或者干擾miR-182后,檢測內(nèi)源性IFN-α/β的生成;5將si-IFN-αreceptor I(IFNAR1)和si-IFNAR2轉(zhuǎn)染U-251 MG和NPCs細(xì)胞,使IFNAR1與IFNAR2沉默,檢測干擾素刺激因子(ISGs)、MxA與OAS1的表達(dá),同時(shí)檢測HCMV拷貝數(shù)與病毒滴度;6采用兩種在線軟件TargetScan 7.0(targetscan.org/)與miRanda(microrna.org/)預(yù)測miR-182的靶基因,并通過雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)對可能作用的靶基因(the fork head box O3,FOXO3)進(jìn)行驗(yàn)證。在HCMV感染前轉(zhuǎn)染miR-182模擬物到U-251 MG和NPCs中,檢測FOXO3及其下游基因IRF7的蛋白表達(dá)變化;7靶基因功能研究,通過構(gòu)建pcDNA-FOXO3過表達(dá)質(zhì)粒,將質(zhì)粒與miR-182模擬物共同轉(zhuǎn)染細(xì)胞進(jìn)行過表達(dá),檢測FOXO3過表達(dá)對對miR-182調(diào)控干擾素免疫應(yīng)答及HCMV復(fù)制的干預(yù)作用;8通過尾靜脈將agomiR-182注射到5只小鼠中,使其在小鼠體內(nèi)過表達(dá),檢測miR-182過表達(dá)對HCMV在小鼠體內(nèi)復(fù)制的影響。研究結(jié)果1 HCMV感染細(xì)胞會(huì)導(dǎo)致宿主細(xì)胞microRNA表達(dá)譜的差異,其中miR-182上調(diào)變化最為顯著。且該效應(yīng)呈時(shí)間劑量依賴。2在U-251MG,NPCs兩株神經(jīng)細(xì)胞中,過表達(dá)miR-182能夠抑制病毒復(fù)制,而沉默miR-182的表達(dá)上調(diào)HCMV滴度。3在U-251MG,NPCs兩株神經(jīng)細(xì)胞中過表達(dá)miR-182促進(jìn)I型干擾素免疫應(yīng)答,而沉默miR-182的表達(dá)抑制I型干擾素免疫應(yīng)答。同時(shí)我們發(fā)現(xiàn)HCMV感染能夠引起ISGs、MxA與OAS1表達(dá)上調(diào),而干擾IFNAR1與IFNAR2可以解除這種上調(diào)的作用,更重要的是還可以解除miR-182模擬物對病毒復(fù)制的抑制作用。4通過兩種不同軟件,我們發(fā)現(xiàn)miR-182的靶基因可能為FOXO3。通過雙熒光素酶報(bào)告基因試驗(yàn)證實(shí)FOXO3為miR-182的靶基因。另一方面,我們還發(fā)現(xiàn)在病毒感染情況下,miR-182過表達(dá)能夠抑制FOXO3的表達(dá),增強(qiáng)IRF7的轉(zhuǎn)錄活性。5 miR-182過表達(dá)促進(jìn)干擾素免疫應(yīng)答,抑制HCMV的復(fù)制。但是同時(shí)轉(zhuǎn)染pcDNA-FOXO3以后,miR-182的抗病毒功能被抑制。正相反,同時(shí)轉(zhuǎn)染si-IRF7后,miR-182的抗病毒功能得到增強(qiáng)。6在動(dòng)物模型中miR-182過表達(dá)同樣能夠抑制HCMV的復(fù)制,且FOXO3和IRF7水平對應(yīng)調(diào)控。研究結(jié)論1 HCMV感染神經(jīng)細(xì)胞顯著上調(diào)miR-182的表達(dá)。2神經(jīng)細(xì)胞中miR-182過表達(dá)通過上調(diào)IFN-α/β的表達(dá),激活下游ISGs、MxA與OAS1的表達(dá),進(jìn)而抑制HCMV的復(fù)制。3神經(jīng)細(xì)胞中miR-182通過靶向抑制FOXO3,上調(diào)IRF7從而激活干擾素免疫應(yīng)答,發(fā)揮抗病毒作用。4動(dòng)物模型中miR-182過表達(dá)同樣能夠抑制HCMV的復(fù)制。
【圖文】：

第一章 引言因組結(jié)構(gòu)特征因組是所有皰疹病毒中最大的，GC 含量較高。與單純皰疹的獨(dú)特序列(Unique Long, UL)和短的獨(dú)特序列(Unique Sh的兩端都帶有反向重復(fù)序列(TRL, IRL, IRS 和 TRS)（圖 1-1毒的基因組可以呈現(xiàn) 4 種形式的同分異構(gòu)體。相反，，動(dòng)物 C病毒的基因組是線性的，沒有重復(fù)區(qū)域。UL 和 US 區(qū)域的反的直接重復(fù)序列(a，b，c)和 UL-US 連接處的反向重復(fù)序列(a

第一章 引言3-1;miR-m22-1;miR-M23-2;miR-M44-1;miR-M55-1;miRm59-m59-2;miR-M87-1;miR-m88-1;miR-M95-1;miR-m107-1;miR-1; miRm108-2V 24 miR-r1-1;miR-r1-2;miR-r1-3;miR-r1-4;miR-r6-1;miR-R37-1;m3.1-1;miRr43.1-2;miR-OriLyt-1;miR-OriLyt-2;miRR87-1;miR;miR-R91-1;miR-r95.1-1;miR-r111.1-1;miR-r111.1-2;miR-r11miR-r111.2-1;miR-r111.2-2;miR-r111.2-3;miR-r111.2-4;miR-5;miR-r111.2-6; miR-r170-1
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R392

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 胡孟慧;俞如旺;;疫苗摭談[J];生物學(xué)教學(xué);2017年05期

2 ;春季過敏漫談[J];今日中國;2017年03期

3 宮曉煒;曹小安;鄭福英;陳啟偉;周繼章;殷宏;才學(xué)鵬;;牛病毒性腹瀉病毒感染的免疫應(yīng)答研究進(jìn)展[J];中國獸醫(yī)科學(xué);2012年11期

4 陳敏;對HIV的強(qiáng)免疫應(yīng)答可能加劇感染[J];國外醫(yī)學(xué)(預(yù)防、診斷、治療用生物制品分冊);2004年04期

5 陳敏;改進(jìn)CpG分子以刺激免疫應(yīng)答[J];國外醫(yī)學(xué).預(yù)防.診斷.治療用生物制品分冊;2003年02期

6 修方明;DNA激活天然免疫應(yīng)答必需DNA-PKcs[J];國外醫(yī)學(xué)(免疫學(xué)分冊);2001年05期

7 黃海武;嬰兒皮內(nèi)接種脊髓灰質(zhì)炎滅活疫苗的免疫應(yīng)答[J];國外醫(yī)學(xué).預(yù)防.診斷.治療用生物制品分冊;1993年02期

8 Moudgi GC;林建東;;麻醉和免疫應(yīng)答[J];國外醫(yī)學(xué).麻醉學(xué)與復(fù)蘇分冊;1987年06期

9 Norris D;方栩;;鋅和皮膚炎癥[J];國外醫(yī)學(xué).皮膚病學(xué)分冊;1987年02期

10 劉陽;;蛋白質(zhì)的免疫原性——免疫應(yīng)答的需要和限制[J];國外醫(yī)學(xué)(分子生物學(xué)分冊);1987年02期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 徐強(qiáng);;免疫應(yīng)答的選擇性調(diào)控[A];全國第十一屆生化與分子藥理學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2009年

2 曹雪濤;;免疫應(yīng)答調(diào)控的研究進(jìn)展[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十二次全國皮膚性病學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2006年

3 鄭學(xué)禮;;蚊的自然免疫應(yīng)答[A];全國寄生蟲學(xué)與熱帶醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2006年

4 張學(xué)光;;共刺激分子及其調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)與免疫應(yīng)答的調(diào)節(jié)[A];第十屆全國免疫學(xué)學(xué)術(shù)大會(huì)分會(huì)場交流報(bào)告（二）[C];2015年

5 袁仕善;吳少庭;秦莉;張仁利;高世同;黃達(dá)娜;余新炳;;SARS冠狀病毒N蛋白的表達(dá)及其誘導(dǎo)的免疫應(yīng)答[A];全國新出現(xiàn)傳染病學(xué)術(shù)研討會(huì)資料匯編[C];2004年

6 周佩軍;王慧;楊能;邵琨;徐達(dá);王祥慧;沈周俊;周光炎;;骨髓混合培養(yǎng)體外特異性下調(diào)免疫應(yīng)答[A];第十五屆全國泌尿外科學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2008年

7 曹偉;郗雪艷;馬馳;崔蓮仙;何維;;ULBPs剪切變體的鑒定與功能研究[A];中國免疫學(xué)會(huì)第五屆全國代表大會(huì)暨學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要[C];2006年

8 張智紅;劉順;楊飛;駱美潔;駱清銘;;基于熒光蛋白模型抗原的活體免疫應(yīng)答光學(xué)成像研究[A];第九屆全國免疫學(xué)學(xué)術(shù)大會(huì)論文集[C];2014年

9 韋嘉;;HBV感染免疫應(yīng)答[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十六次全國病毒性肝炎及肝病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2013年

10 黃文竹;胡文慧;陳晉;王峗;胡祖權(quán);周靜;劉麗娜;邱煒;唐福州;張世超;歐陽燕;曾柱;;樹突狀細(xì)胞誘導(dǎo)T細(xì)胞免疫應(yīng)答的數(shù)學(xué)模型[A];第十二屆全國生物力學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議暨第十四屆全國生物流變學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議會(huì)議論文摘要匯編[C];2018年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 首席記者 劉志勇;抗細(xì)菌天然免疫應(yīng)答新機(jī)制被揭示[N];健康報(bào);2018年

2 錢錚;抑制性T細(xì)胞抑制免疫應(yīng)答的機(jī)制被發(fā)現(xiàn)[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2007年

3 余志平;抗RSV感染研究聚焦免疫應(yīng)答[N];中國醫(yī)藥報(bào);2005年

4 記者 唐先武邋特約記者 肖鑫;我科學(xué)家發(fā)現(xiàn)免疫應(yīng)答與調(diào)控的新型分子機(jī)制[N];科技日報(bào);2008年

5 解放軍302醫(yī)院肝病生物治療研究中心 王福生 整理 黃顯斌 洪建國;免疫應(yīng)答 乙肝轉(zhuǎn)歸的重要影響因素[N];健康報(bào);2012年

6 陳列歡;T肽讓HIV無處可藏[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2003年

7 江一帆;全球治癌藥市場五年內(nèi)翻番[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2001年

8 山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院 成建國;對豬群進(jìn)行病原學(xué)與血清學(xué)動(dòng)態(tài)監(jiān)測[N];中國畜牧獸醫(yī)報(bào);2006年

9 記者 張佳星;《自然免疫學(xué)綜述》發(fā)表我學(xué)者文章[N];科技日報(bào);2015年

10 編譯 李勇;PD1藥物抗腫瘤作用令人關(guān)注[N];中國醫(yī)藥報(bào);2013年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 何霞;神經(jīng)細(xì)胞中MicroRNA-182靶向FOXO3激活Ⅰ型干擾素免疫應(yīng)答發(fā)揮抗人巨細(xì)胞病毒作用[D];鄭州大學(xué);2019年

2 程巧;BRCC36調(diào)控STAT1穩(wěn)定性及其天然抗病毒免疫應(yīng)答的機(jī)制研究[D];蘇州大學(xué);2017年

3 葉芝旭;PCFs調(diào)控RSV感染早期抗病毒免疫應(yīng)答及氣道炎癥反應(yīng)的機(jī)制研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2017年

4 高輝;輻射誘導(dǎo)小鼠免疫應(yīng)答的基因組學(xué)基礎(chǔ)及表觀遺傳學(xué)機(jī)制[D];吉林大學(xué);2018年

5 周曉輝;基因槍接種HBs DNA疫苗誘生Th2型免疫應(yīng)答的機(jī)理及促進(jìn)其向Th1型轉(zhuǎn)換的研究[D];復(fù)旦大學(xué);2004年

6 華瑞;體內(nèi)增強(qiáng)治療性乙型肝炎核酸疫苗免疫應(yīng)答的研究[D];吉林大學(xué);2006年

7 王凌;腦內(nèi)免疫應(yīng)答相關(guān)核團(tuán)的研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);1999年

8 雷連成;豬胸膜肺炎放線桿菌差減基因文庫構(gòu)建及免疫應(yīng)答相關(guān)基因篩選[D];吉林大學(xué);2007年

9 董生福;人工合成寡糖促進(jìn)乙型肝炎病毒抗原誘導(dǎo)免疫應(yīng)答的研究[D];復(fù)旦大學(xué);2007年

10 許國晶;牙鲆免疫應(yīng)答的溫度效應(yīng)及黏膜免疫分子的研究[D];中國海洋大學(xué);2012年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 馮征山;寨卡病毒在小鼠體內(nèi)的增殖及其誘導(dǎo)的免疫應(yīng)答分析[D];中國科學(xué)院大學(xué)(中國科學(xué)院武漢病毒研究所);2018年

2 宋盈瑩;IL-36促進(jìn)CD4~+T細(xì)胞IL-9的表達(dá)及其在腫瘤免疫應(yīng)答中作用的研究[D];蘇州大學(xué);2018年

3 魯翰林;IL-36γ刺激聯(lián)合阻斷PD-1信號(hào)促進(jìn)腫瘤免疫應(yīng)答的研究[D];蘇州大學(xué);2018年

4 曹鳳強(qiáng);納米腫瘤疫苗的制備及其抗腫瘤效應(yīng)研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2018年

5 賈哲坤;miR-155通過靶向抑制TAB2調(diào)節(jié)M.ovipneumoniae感染引起的免疫應(yīng)答[D];寧夏大學(xué);2015年

6 邵志強(qiáng);FAM114A1調(diào)控LPS引起的免疫應(yīng)答及其機(jī)制的初步分析[D];廈門大學(xué);2017年

7 田曉霞;小G蛋白R(shí)if對病原細(xì)菌誘導(dǎo)的宿主先天性免疫應(yīng)答的調(diào)控[D];內(nèi)蒙古大學(xué);2018年

8 甄媛媛;多功能脂質(zhì)體構(gòu)建微針陣列疫苗佐劑-雙傳遞系統(tǒng)[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2017年

9 岳翔;參與先天性免疫應(yīng)答的miRNA的鑒定及其功能的初步研究[D];安徽大學(xué);2012年

10 林妍;活動(dòng)期肺結(jié)核免疫應(yīng)答基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建與分析[D];吉林大學(xué);2016年

本文編號(hào)：2606477