【摘要】：背景蟲媒病毒是一類由蚊、蜱、白蛉、蠓等吸血昆蟲傳播,通過(guò)叮咬引起人畜疾病的病毒,該病毒能夠引起自然疫源性疾病和人獸共患病。蟲媒病毒結(jié)構(gòu)較簡(jiǎn)單,一般是RNA病毒,外層有包膜結(jié)構(gòu)。蟲媒病毒進(jìn)入吸血昆蟲體內(nèi),并在體內(nèi)增殖且不會(huì)使昆蟲致病,然后再通過(guò)昆蟲叮咬動(dòng)物轉(zhuǎn)入宿主,并大量繁殖,引發(fā)相關(guān)臨床病癥。50年代只發(fā)現(xiàn)35種,1974年在國(guó)際蟲媒病毒中心登記的已達(dá)359種,截至1989年發(fā)展為532種,其中125種對(duì)人畜致病,某些病毒可引起嚴(yán)重的疾病,如腦炎、失明等。蟲媒病毒呈全球分布,主要在中溫帶、亞熱帶和熱帶。我國(guó)的蟲媒病毒研究起步較晚,目前已經(jīng)分離出的病毒有乙型腦炎病毒、森林腦炎病毒、新疆出血熱病毒、登革熱病毒、西尼羅病毒、蓋塔病毒、版納病毒等。我國(guó)存在多種蟲媒病毒,但我國(guó)地域廣闊,環(huán)境復(fù)雜,物種繁多,為進(jìn)一步進(jìn)行蟲媒病毒的調(diào)查與研究提出了挑戰(zhàn)。我國(guó)蚊蟲及蠓蟲種類繁多,分布廣泛,是十分重要的類群。從上世紀(jì)50年代我國(guó)就開展對(duì)蠓研究直到現(xiàn)在,隨著研究的逐步深入,蠓的新種的發(fā)現(xiàn)不斷地被報(bào)道。尤其是吸血蠓類與人畜關(guān)系密切,而且有些蠓種是人畜共患病的重要傳播媒介,一方面可引起動(dòng)物性疾病,給畜禽業(yè)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失,另一方面也給人類健康帶來(lái)巨大威脅。研究表明大多數(shù)蚊媒傳染病都是由三種蚊子傳播的:伊蚊、按蚊和庫(kù)蚊。伊蚊屬中的物種,特別是白紋伊蚊和埃及伊蚊是許多人畜共患疾病的載體,包括登革熱病毒、基孔肯雅病毒、寨卡病毒和黃熱病。按蚊主要傳播瘧疾和一些其他病原體,例如能引起絲蟲病的犬心絲蟲。庫(kù)蚊主要是尖音庫(kù)蚊、跗斑庫(kù)蚊和三帶喙庫(kù)蚊,攜帶并傳播西尼羅河病毒和圣路易斯腦炎病毒。所有三個(gè)屬中的蚊子范圍都在不斷擴(kuò)展。其中埃及伊蚊是最普遍的,通過(guò)反復(fù)入侵幾乎在全球都有分布。隨著蚊子種類擴(kuò)大其地理分布,它們所帶來(lái)的疾病正在擴(kuò)大,并且預(yù)計(jì)會(huì)繼續(xù)擴(kuò)大,這對(duì)以前未受影響的地方來(lái)說(shuō)是一個(gè)新的挑戰(zhàn)。海南位于東經(jīng)108°37'-117°50',北緯3°58'-20°20',北隔瓊州海峽與廣東省雷州半島相望;西臨北部灣;南達(dá)曾母暗沙,與馬來(lái)西亞為鄰;東南瀕臨太平洋,與菲律賓、印度尼西亞等相望,屬于熱帶季風(fēng)氣候,存在蟲媒病毒繁殖和傳播的天然條件。海南省是流行性乙型腦炎和登革熱的流行區(qū),曾于2000年在三亞市及樂(lè)東縣出現(xiàn)乙腦暴發(fā)疫情,而且早在1985年便分離出4株乙腦病毒(JEV);海南曾于1979、1980-1991年發(fā)生過(guò)登革熱大流行,并于1989年分離出登革熱2型毒株;此外,還分離到多種甲病毒、黃病毒等其他病毒。隨著海南省旅游業(yè)的迅猛發(fā)展,使人員流動(dòng)增多,同時(shí)也為蟲媒病毒的輸入以及多樣性提供了條件,但是近三十年來(lái)尚未在海南省開展過(guò)系統(tǒng)性的蟲媒病毒調(diào)查研究,為了了解海南省蚊蟲種類以及分布特征是否有所變化,當(dāng)?shù)匚ハx攜帶病毒的種類以及流行特點(diǎn)是否有所改變,因此本研究所選采集點(diǎn)為此前分離到病毒及發(fā)生過(guò)乙腦及登革熱大流行等疫情的地區(qū),并于2017、2018年連續(xù)2年對(duì)海南省6個(gè)市縣進(jìn)行系統(tǒng)的蚊蟲和蠓蟲標(biāo)本采集和蟲媒病毒的調(diào)查研究。對(duì)預(yù)防和控制當(dāng)?shù)叵x媒病毒病,為今后制定相應(yīng)的防治和控制措施,避免疫情擴(kuò)大流行具有重要意義。目的對(duì)海南省6個(gè)市縣夏季蚊蟲和蠓蟲種類和數(shù)量分布情況進(jìn)行系統(tǒng)調(diào)查,了解當(dāng)?shù)刂饕ハx蚊蟲及蠓蟲所攜帶的蟲媒病毒。為當(dāng)?shù)叵x媒病毒及相關(guān)人畜疾病的預(yù)防與控制提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。方法2017、2018年8月份在海南省6個(gè)市縣的村莊選擇人舍和動(dòng)物飼養(yǎng)圈(牛圈、羊圈、豬圈等)蚊蟲滋生環(huán)境設(shè)置采樣點(diǎn)進(jìn)行蚊蟲標(biāo)本采集。對(duì)所采集的標(biāo)本在冰排上進(jìn)行形態(tài)學(xué)分類及鑒定,按照采集地區(qū)、采集日期、孳生環(huán)境以及蚊蟲種類、數(shù)量等基本信息進(jìn)行編號(hào)登記,立即放入液氮中保存并運(yùn)送至實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行分離與鑒定。在實(shí)驗(yàn)室對(duì)所采集標(biāo)本進(jìn)行研磨、離心和分裝,研磨上清液平行接種BHK-21細(xì)胞(金黃色地鼠腎細(xì)胞)和C6/36細(xì)胞(白紋伊蚊卵細(xì)胞)進(jìn)行病毒分離,同時(shí)制備海南省蚊蟲標(biāo)本的cDNA文庫(kù),采用RT-PCR法進(jìn)行特異性核酸篩檢。細(xì)胞出現(xiàn)病變作用(CPE)時(shí)收取病毒液并使用分子生物學(xué)方法對(duì)陽(yáng)性分離物進(jìn)行分子生物學(xué)鑒定,結(jié)果使用多種軟件對(duì)病毒基因組核苷酸序列進(jìn)行序列同源性分析及分子遺傳學(xué)分析。結(jié)果在2017年和2018年的8月份,在海南省儋州市、澄邁縣、文昌市、昌江黎族自治縣、東方市、樂(lè)東黎族自治縣共采集到4屬(庫(kù)蚊、阿蚊、伊蚊、按蚊)7種15097只蚊蟲和11360只待鑒定蠓蟲。采集的蚊蟲包括三帶喙庫(kù)蚊13990只,占蚊蟲采集總數(shù)92.67%(13990/15097),此外還采集到阿蚊780只,白紋伊蚊37只,按蚊37只�？梢娙龓о箮�(kù)蚊是以上采集點(diǎn)的優(yōu)勢(shì)蚊種。2017年8月18日~8月21日,在海南省儋州市、澄邁縣、文昌市三個(gè)地區(qū)共采集到19604只已鑒定蠓蟲,包括1屬22種(荒川庫(kù)蠓、異域庫(kù)蠓、尖喙庫(kù)蠓等)。其中儋州市采集到的蠓種以尖喙庫(kù)蠓、黃胸庫(kù)蠓為主,分別為3593、1640只,占儋州市庫(kù)蠓總數(shù)的40.5%(3593/8872)、18.55%(1640/8872),可見尖喙庫(kù)蠓為當(dāng)?shù)貎?yōu)勢(shì)蠓種;澄邁縣采集到的蠓種以黃胸庫(kù)蠓、荒川庫(kù)蠓為主,分別為887、529只,占澄邁縣庫(kù)蠓總數(shù)的33.2%(887/2673)、19.8%(529/2673),可見黃胸庫(kù)蠓為當(dāng)?shù)貎?yōu)勢(shì)蠓種;文昌市采集到的蠓種以異域庫(kù)蠓、荒川庫(kù)蠓為主,分別為3102、2102只,占文昌市庫(kù)蠓總數(shù)的38.5%(3102/8059)、26.1%(2102/8059),可見異域庫(kù)蠓為當(dāng)?shù)貎?yōu)勢(shì)蠓種�？傮w來(lái)說(shuō),尖喙庫(kù)蠓、荒川庫(kù)蠓占比較大,分別占庫(kù)蠓總數(shù)的28.1%(5499/19604)、18.3%(3589/19604)。所有蚊蟲(162批)和待鑒定蠓蟲(37批)標(biāo)本共為199批次,儋州市、澄邁縣、文昌市、昌江黎族自治縣、東方市、樂(lè)東黎族自治縣分別為75批、63批、30批、9批、8批和14批。經(jīng)實(shí)驗(yàn)室常規(guī)處理后接種BHK-21細(xì)胞和C6/36細(xì)胞,共獲得4株可以穩(wěn)定傳代的病毒分離物,經(jīng)分子生物學(xué)檢測(cè)與鑒定其中3株病毒為乙腦病毒,均屬于基因1型乙腦病毒(均來(lái)自三帶喙庫(kù)蚊),1株蓋塔病毒(分離自三帶喙庫(kù)蚊),蠓蟲標(biāo)本未獲得病毒分離物。使用12種病毒屬特異性和種特異性病毒基因擴(kuò)增引物對(duì)199批標(biāo)本研磨液進(jìn)行病毒基因擴(kuò)增,結(jié)果為蚊蟲標(biāo)本均為陰性,而在5批蠓蟲標(biāo)本中獲得OYA病毒基因擴(kuò)增陽(yáng)性,全部于豬圈中采集得到,其中4株來(lái)自于儋州市,1株來(lái)自于澄邁縣。結(jié)論本研究于2017和2018年夏季連續(xù)在我國(guó)海南省選取6個(gè)市縣進(jìn)行蟲媒病毒的調(diào)查研究,共采集到4屬7種15097只蚊蟲和11360只待鑒定蠓蟲,其中三帶喙庫(kù)蚊為當(dāng)?shù)貎?yōu)勢(shì)蚊種。本次蚊蟲標(biāo)本共研磨199批,共分離到4株可以穩(wěn)定傳代的病毒分離物,均分離自三帶喙庫(kù)蚊,均來(lái)自儋州市,其中三株為JEV,且均為基因I型,另一株為GETV,提示當(dāng)?shù)厝匀淮嬖谝夷X病毒在自然界的循環(huán)。此外,在海南省采集的多批蠓蟲標(biāo)本中檢測(cè)到阿卡斑病毒基因擴(kuò)增陽(yáng)性,這是首次在海南省自然界采集的吸血昆蟲標(biāo)本中發(fā)現(xiàn)阿卡斑病毒的存在,對(duì)當(dāng)?shù)貏?dòng)物疾病的預(yù)防控制提出新的挑戰(zhàn)。
【圖文】：

圖 1.1.1 海南省吸血昆蟲標(biāo)本采集地點(diǎn)Figure 1.1.1 The collection sites of blood sucking insects in Hainan province注： 表示 2018 年吸血昆蟲標(biāo)本采集點(diǎn)； 表示 2017 年吸血昆蟲采集點(diǎn)。1.2 采集工具本研究采集吸血昆蟲所用到的主要工具為“功夫小帥”牌紫外誘蚊燈（WuhanLucky Star Environmental Protection Technology Co., Ltd., Hubei, China）、牛帳（以一只牛做誘餌，外圍搭蚊帳誘捕蚊蟲標(biāo)本，長(zhǎng) 4 米、寬 4 米、高 1.8 米）。由于蚊蟲對(duì)溫度敏感，具有趨光性，習(xí)慣群聚。因此誘蚊燈能夠高效捕蚊，將誘蚊燈懸掛在人房、豬圈、牛圈、雞圈等易于蚊蟲滋生的環(huán)境，誘蚊燈懸掛距離地面大約 1.5 米，蚊蟲比較密集，其它采集工具包括：吸蚊器、蚊籠、電池、手電筒、蚊蟲收集網(wǎng)、剪刀、鑷子、冰排、平皿、凍存管、記號(hào)筆、信息采集表、膠布、放大鏡、液氮罐、濾紙。1.3 吸血昆蟲標(biāo)本的處理

圖 1.1.2 海南省采集吸血昆蟲標(biāo)本的構(gòu)成Figure 1.1.2 Composing of blood sucking insects collected in Hainan province所述，海南省屬于熱帶季風(fēng)氣候，年平均氣溫為 22~26℃，雨量充沛約為 1639 mm，濕度高，地形地貌復(fù)雜，其自然條件非常適宜蚊蟲的孳生密度最大，，本研究在 2017、2018 年 8 月份在海南省多個(gè)縣市開展蟲，既保證了采集蚊蟲的數(shù)量，也可以在一定程度上反映海南省蚊蟲種研究在海南省共采集到共采集到 4 屬（庫(kù)蚊、阿蚊、伊蚊、按蚊）7 種 1 11360 只待鑒定蠓蟲。包括包括阿蚊、白紋伊蚊、按蚊、三帶喙庫(kù)蚊11360只蠓蟲，其中以三帶喙庫(kù)蚊居多，為 13990只，占蚊蟲采集總數(shù) 92/15097）。是當(dāng)?shù)氐膬?yōu)勢(shì)蚊種。經(jīng)過(guò)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，當(dāng)?shù)剞r(nóng)村的耕地以種植般數(shù)十戶農(nóng)戶所組成的村落位于大面積水稻周圍，而且農(nóng)戶家中大多雞，羊等家養(yǎng)動(dòng)物。各種動(dòng)物畜圈位于農(nóng)戶的庭院中，使得人畜的生
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R384.1

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9 付士紅;于德山;g

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