【摘要】：目的克隆、表達(dá)惡性瘧原蟲紅細(xì)胞表面膜蛋白1 DBα(PfEMP1-DBLα)及其3個(gè)分段區(qū)域編碼基因,篩選出PfEMP1-DBα區(qū)與紅細(xì)胞表面受體-肝素/硫化肝素親和力最強(qiáng)的序列。方法根據(jù)大腸埃希菌密碼子組成特點(diǎn),重新優(yōu)化并合成惡性瘧原蟲FCR3S1.2株P(guān)fEMP1-DBLα1245基因序列,采用PCR方法,將優(yōu)化后的基因序列分DBLαA、DBLαB和DBLαC等3段擴(kuò)增。分別將全長(zhǎng)基因和3個(gè)片段基因亞克隆至PGEX-4T-1載體,轉(zhuǎn)化至大腸埃希菌BL21(DE3),異丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)。用谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶標(biāo)簽親和層析法純化表達(dá)產(chǎn)物。通過重組蛋白與肝素的親和試驗(yàn)及糖胺聚糖(GAG)抑制試驗(yàn),分析功能區(qū)與肝素的親和力情況。結(jié)果含重組質(zhì)粒的4個(gè)表達(dá)菌株(BL21-GEX-DBLα1245、BL21-GEX-DBLαA、BL21-GEX-DBLαB和BL21GEX-DBLαC)經(jīng)IPTG誘導(dǎo),獲得以可溶形式存在的重組蛋白,相對(duì)分子質(zhì)量(M_r 73 600、M_r 41 600、M_r 42500和M_r 41 500)與預(yù)測(cè)的融合蛋白大小相符。重組蛋白與肝素的親和試驗(yàn)及GAG抑制試驗(yàn)結(jié)果表明,在PfEMP1-DBLα分段表達(dá)的3個(gè)功能區(qū)中,DBLα1245、DBLαA(1～142 aa)、DBLαB(143～284 aa)和DBLαC(285～415 aa)等4個(gè)重組蛋白均可與肝素結(jié)合,陰性對(duì)照GST不與肝素結(jié)合,其中DBLαC對(duì)肝素的親和力最強(qiáng)。結(jié)論 PfEMP1-DBLα區(qū)與肝素/硫化肝素親和力最強(qiáng)的序列為Q_(285)～Y_(415)(即DBLαC),該段序列在惡性瘧原蟲感染的紅細(xì)胞與周圍紅細(xì)胞的黏附過程中起關(guān)鍵作用。

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 黃儉;喀麥隆南部分離到對(duì)氯喹高度敏感的惡性瘧原蟲分離物[J];國(guó)際醫(yī)學(xué)寄生蟲病雜志;1987年06期

2 王君薌;;從人血中分離含活的惡性瘧原蟲裂殖體紅細(xì)胞的方法[J];國(guó)際醫(yī)學(xué)寄生蟲病雜志;1979年02期

3 張巖;尹繼剛;陳啟軍;;多糖與惡性瘧原蟲的分子致病機(jī)制[J];中國(guó)寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志;2010年03期

4 邱宗文;四膜蟲細(xì)胞表達(dá)惡性瘧原蟲環(huán)子孢子蛋白并定位于細(xì)胞表面[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).寄生蟲病分冊(cè);2004年01期

5 杜承;尹繼剛;陸慧君;姜寧;常巧呈;陳啟軍;;惡性瘧原蟲膜蛋白Pf332-DBL區(qū)在畢赤酵母中的表達(dá)[J];中國(guó)生物制品學(xué)雜志;2010年03期

6 王興相;惡性瘧原蟲離體培養(yǎng)產(chǎn)生的抗原[J];國(guó)際醫(yī)學(xué)寄生蟲病雜志;1975年03期

7 ;人體惡性瘧原蟲的培養(yǎng)[J];國(guó)際醫(yī)學(xué)寄生蟲病雜志;1977年05期

8 徐克繼;人惡性瘧原蟲(緬甸Thau株)子孢子傳播給夜猴[J];國(guó)際醫(yī)學(xué)寄生蟲病雜志;1978年03期

9 楊士靜;試用耐熱血清可溶性抗原免疫猴對(duì)諾氏瘧原蟲繼發(fā)感染的防御作用[J];國(guó)際醫(yī)學(xué)寄生蟲病雜志;1978年04期

10 蘇信生;以無(wú)脂肪酸的牛白蛋白代替血漿體外培養(yǎng)惡性瘧原蟲[J];國(guó)際醫(yī)學(xué)寄生蟲病雜志;1978年05期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 楊汝春;魯盈;朱曉玲;王軍;林宜;;葡萄糖對(duì)SVAREC細(xì)胞膜蛋白P-glycoprotein轉(zhuǎn)運(yùn)及表達(dá)的影響[A];第七屆全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合腎臟病會(huì)議論文匯編[C];2003年

2 薛蓉;王碩;王春雨;朱濤;李菲;;一個(gè)包含Nramp1第四跨膜區(qū)域的28肽的NMR表征[A];第十四屆全國(guó)波譜學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要集[C];2006年

3 張鳳;儲(chǔ)以微;熊思東;;肝素抗炎機(jī)制研究——肝素抑制T細(xì)胞活化的機(jī)制研究[A];第六屆全國(guó)免疫學(xué)學(xué)術(shù)大會(huì)論文集[C];2008年

4 陳啟軍;Mats Wahlgren;李德昌;蓋欣;尹繼剛;楊舉;;惡性瘧原蟲抗原變異機(jī)理的研究(英文)[A];生命科學(xué)與生物技術(shù)：中國(guó)科協(xié)第三屆青年學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];1998年

5 曲莉芝;顧為望;吳請(qǐng)紅;;應(yīng)用鼠虐動(dòng)物模型對(duì)惡性瘧原蟲多表位疫苗保護(hù)性效果評(píng)價(jià)[A];中國(guó)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)會(huì)第六屆學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2004年

6 曹俊;Osamu Kaneko;Amporn Thongkukiatkul;Mayumi Tachibana;Hitoshi Otsuki;Takafumi Tsuboi;Motomi Torii;高琪;;惡性瘧原蟲入侵紅細(xì)胞相關(guān)棒狀體頸部蛋白(PfRON2)的研究[A];全國(guó)寄生蟲學(xué)與熱帶醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2008年

7 李莉;吳英松;寧云山;李妍;李明;;惡性瘧原蟲乳酸脫氫酶的純化及免疫活性鑒定[A];中國(guó)動(dòng)物學(xué)會(huì)原生動(dòng)物學(xué)分會(huì)第十二次學(xué)術(shù)討論會(huì)論文摘要匯編[C];2003年

8 楊永長(zhǎng);喻華;劉華;肖代雯;姜偉;杜瓊;王秦;黃文芳;;TritonX-114去污劑法提取大腸桿菌膜蛋白[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第九次全國(guó)檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議暨中國(guó)醫(yī)院協(xié)會(huì)臨床檢驗(yàn)管理專業(yè)委員會(huì)第六屆全國(guó)臨床檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室管理學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2011年

9 馬長(zhǎng)玲;余新炳;李學(xué)榮;單志新;吳忠道;;惡性瘧原蟲FCCI/HN株P(guān)fI2體外擴(kuò)增、克隆及序列分析[A];中國(guó)動(dòng)物學(xué)會(huì)第六屆全國(guó)青年寄生蟲學(xué)工作者學(xué)術(shù)討論會(huì)論文摘要集[C];2000年

10 吳英松;李明;董文其;李英杰;;惡性瘧原蟲乳酸脫氫酶的表達(dá)及免疫活性鑒定[A];中國(guó)原生動(dòng)物學(xué)學(xué)會(huì)第十一次學(xué)術(shù)討論會(huì)論文摘要匯編[C];2001年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 哈特穆特·米歇爾;作為藥物靶點(diǎn)的膜蛋白質(zhì)[N];健康報(bào);2006年

2 錢錚;病菌為啥會(huì)耐藥？自備“水泵”幫助“排毒”[N];新華每日電訊;2006年

3 錢錚;耐藥病菌細(xì)胞膜上存在“水泵”蛋白[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2006年

4 本報(bào)記者　張亮;昔日幫兇今日克星[N];科技日?qǐng)?bào);2007年

5 韓林 夏雪;瘧疾研究取得里程碑式的成就[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2003年

6 王瑞;G蛋白偶聯(lián)受體的高分辨結(jié)構(gòu) Towards High Resolution Structures of G-proteinCoupledReceptors[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2006年

7 賀曉;水通道：從原子結(jié)構(gòu)到臨床醫(yī)學(xué) Aquaporin Water Channels：From Atomic Structure to Clinical Medicine[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2006年

8 記者 劉海英;抗體會(huì)助長(zhǎng)登革熱病毒感染更多細(xì)胞[N];科技日?qǐng)?bào);2010年

9 阿勝 譯;抗瘧征途遇難關(guān)[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2002年

10 陳列歡;芯片技術(shù)為瘧原蟲“拍快照”[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2003年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 李會(huì)良;利用基因組數(shù)據(jù)庫(kù)篩選惡性瘧原蟲抗原候選基因[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2001年

2 潘勇;原子力顯微鏡在人工磷脂雙分子層、膜蛋白和成纖維細(xì)胞的應(yīng)用研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2004年

3 杜承;惡性瘧原蟲Pf332抗原的免疫原性分析[D];吉林大學(xué);2010年

4 姚朗;惡性瘧原蟲保護(hù)性抗原復(fù)合基因DNA疫苗的構(gòu)建及免疫學(xué)特征研究[D];第一軍醫(yī)大學(xué);2000年

5 張冬梅;惡性瘧原蟲主要裂殖子表面蛋白1的表達(dá)及免疫保護(hù)作用的研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2001年

6 吳英松;惡性瘧原蟲乳酸脫氫酶基因的克隆、表達(dá)、單抗制備及瘧疾診斷研究[D];第一軍醫(yī)大學(xué);2001年

7 蔡啟良;利用分子育種技術(shù)構(gòu)建并優(yōu)化篩選抗惡性瘧原蟲多表位人工抗原DNA疫苗[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2004年

8 傅作申;應(yīng)用Drug-western法從cDNA表達(dá)文庫(kù)中篩選青蒿素類抗瘧藥靶標(biāo)蛋白基因[D];中國(guó)人民解放軍軍需大學(xué);2003年

9 曹毅;用基因打靶技術(shù)構(gòu)建惡性瘧原蟲MSP1轉(zhuǎn)基因鼠瘧模型及其應(yīng)用[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2005年

10 宋平;惡性瘧原蟲abstrakt同源基因的克隆及食蟹猴瘧原蟲eIF-4A同源蛋白的cDNA克隆、表達(dá)和ATP酶活性研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2005年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 李鈉;化學(xué)修飾肝素可以抑制P-選擇素介導(dǎo)的白細(xì)胞粘附[D];東北師范大學(xué);2004年

2 朱薇;蛋白酶激活受體在人嗜堿性粒細(xì)胞中的表達(dá)及對(duì)其組胺釋放的影響[D];汕頭大學(xué);2005年

3 任翠平;日本血吸蟲29KD膜外蛋白抗體檢測(cè)的價(jià)值及其單克隆抗體的制備與鑒定[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2008年

4 丁洋;大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞來源的血管內(nèi)皮細(xì)胞貼附ePTFE的實(shí)驗(yàn)研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2008年

5 馬翔宇;新型多價(jià)大腸桿菌噬菌體285P分離鑒定及功能基因組學(xué)研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2009年

6 任昊;肝素和低分子量肝素對(duì)人單核細(xì)胞表面AGE受體的影響[D];第一軍醫(yī)大學(xué);2001年

7 趙輝;中緬邊境惡性瘧原蟲的態(tài)型研究[D];昆明醫(yī)學(xué)院;2011年

8 陳華;復(fù)方萘酚阿奇對(duì)延緩惡性瘧原蟲抗性的實(shí)驗(yàn)性研究[D];大理學(xué)院;2011年

9 韓靜;麥胚無(wú)細(xì)胞蛋白合成系統(tǒng)表達(dá)惡性瘧原蟲環(huán)子孢子蛋白的研究[D];華中科技大學(xué);2011年

10 馮偉云;ELISA方法研究多糖與人干擾素-γ相互作用[D];浙江大學(xué);2004年

，

本文編號(hào)：2572732