【摘要】：目的:觀察SHP-2信號通路中關(guān)鍵接頭蛋白Gab2對SHP-2激活突變引發(fā)的小鼠髓系異常增殖是否具有調(diào)控作用。方法:用Gab2-/-和SHP-2D61G/+模型小鼠建立4種基因型(SHP-2+/+、Gab2-/-、SHP-2D61G/+和SHP-2D61G/+/Gab2-/-)小鼠,解剖分析其脾大小,外周血白細(xì)胞計數(shù),流式細(xì)胞術(shù)檢測外周血及骨髓髓系細(xì)胞表面標(biāo)志分子Mac-1和Gr-1并計數(shù)Mac-1和Gr-1陽性髓系細(xì)胞比例,骨髓造血干/祖細(xì)胞集落形成實驗檢測小鼠造血干細(xì)胞或祖細(xì)胞對細(xì)胞因子反應(yīng)性,Western blotting和免疫沉淀實驗檢測骨髓來源肥大細(xì)胞經(jīng)IL-3刺激后磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)和磷酸化胞外信號調(diào)節(jié)激酶(p-ERK)的活化水平,以及Gab2與SHP-2蛋白的結(jié)合情況。結(jié)果:敲除Gab2后顯著減輕SHP-2激活突變導(dǎo)致的小鼠髓系增殖表型,主要表現(xiàn)在:脾指數(shù)減小,外周血白細(xì)胞減少,小鼠髓系來源的Mac-1和Gr-1陽性細(xì)胞比例降低。與SHP-2D61G/+小鼠相比,經(jīng)IL-3刺激后,骨髓細(xì)胞的集落形成能力顯著降低;骨髓來源肥大細(xì)胞內(nèi)p-ERK和p-Akt表達(dá)明顯下調(diào),SHP-2D61G/+/Gab2-/-小鼠肥大細(xì)胞內(nèi)無Gab2與SHP-2結(jié)合。結(jié)論:敲除Gab2可以明顯減輕SHP-2D61G/+激活突變導(dǎo)致的小鼠髓系異常增殖,這種減輕作用可能與SHP-2無法與Gab2結(jié)合而導(dǎo)致下游信號途徑ERK和Akt活化減弱有關(guān)。
【圖文】：

2敲除Gab2降低SHP-2突變導(dǎo)致的小鼠異常增加的外周血白細(xì)胞4組小鼠外周血白細(xì)胞計數(shù)結(jié)果顯示，與SHP-2+/+小鼠相比，Gab2敲除小鼠外周血白細(xì)胞數(shù)沒有明顯變化，SHP-2D61G/+小鼠外周血白細(xì)胞數(shù)明顯增加，而SHP-2D61G/+/Gab2－/－小鼠白細(xì)胞數(shù)明顯低于SHP-2D61G/+小鼠(P＜0.05)，見圖2，提示Gab2敲除能降低SHP-2突變導(dǎo)致的小鼠外周血白細(xì)胞異常增加。3敲除Gab2降低SHP-2突變小鼠骨髓細(xì)胞中髓系比例Gab2敲除后，SHP-2激活突變導(dǎo)致外周血白細(xì)胞以及骨髓細(xì)胞中髓系異常增加的現(xiàn)象均得到改善。圖3顯示SHP-2D61G/+/Gab2－/－小鼠骨髓Mac-1和Gr-1陽性細(xì)胞比例明顯低于SHP-2D61G/+組小鼠(外周血結(jié)果相同，未列出)。Figure2．Gab2knockoutreducedthenumberofperipheralwhitebloodcellsthatincreasedbytheSHP-2D61G/+muta-tion．Mean±SD．＊＊P＜0.01vsSHP-2+/+;△P＜0.05vsGab2－/－．圖2敲除Gab2降低SHP-2D61G/+突變導(dǎo)致的外周血白細(xì)胞異常增高Figure3．TheproportionofMac-1andGr-1positivecellsobviouslydecreasedinthebonemarrow(BM)cellsofSHP-2D61G/+/Gab2－/－mice．Mean±SD．＊＊P＜0.01vsSHP-2+/+;△P＜0.05vsGab2－/－．圖3SHP-2D61G/+/Gab2－/－小鼠骨髓細(xì)胞Mac-1和Gr-1陽性比例明顯低于SHP-2D61G/+小鼠·1006·

蛋白無法與Gab2蛋白結(jié)合從而阻斷下游信號途徑活化SHP-2在細(xì)胞信號調(diào)控過程中可以和Gab2結(jié)合，對MAPK及PI3K信號途徑活化起重要作用。實驗發(fā)現(xiàn)，，SHP-2激活突變的細(xì)胞在IL-3刺激下，SHP-2與Gab2結(jié)合增加，磷酸化EＲK和Akt水平增高;Gab2敲除阻斷了SHP-2D61G/+與Gab2結(jié)合，與SHP-2D61G/+小鼠相比，SHP-2D61G/+/Gab2－/－小鼠的肥大細(xì)胞在IL-3刺激下，EＲK和Akt磷酸化水平降低，見圖5、6。討論我們前期研究發(fā)現(xiàn)SHP-2D61G/+模型小鼠出現(xiàn)明Figure5．ThebindingcapacityofSHP-2D61G/+withGab2．圖5SHP-2D61G/+蛋白能與Gab2蛋白結(jié)合Figure6．Gab2knockoutreducedthephosphorylationlevelsofEＲKandAktinSHP-2D61G/+mastcells．圖6Gab2敲除后，SHP-2突變導(dǎo)致的EＲK和Akt活化減弱顯的髓系增殖現(xiàn)象，主要表現(xiàn)在:脾臟明顯增大，外周血白細(xì)胞增多，且外周血和骨髓細(xì)胞中髓系細(xì)胞比例明顯升高，其機(jī)制可能與SHP-2激活突變后導(dǎo)致的與細(xì)胞增殖密切相關(guān)的MAPK及PI3K信號途徑異�；罨嘘P(guān)［17-18］。但SHP-2是酪氨酸磷酸酶，其激活突變引起的磷酸酶活性升高理論上應(yīng)該導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)酪氨酸磷酸化蛋白水平降低，多種細(xì)胞信號活性可能會受到抑制。為何在SHP-2D61G/+細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)下游信號的增強(qiáng)呢，這可能與SHP-2還具有接頭蛋白功能有關(guān)。激活突變的SHP-2可以結(jié)合更多的Gab2，進(jìn)而活化Ｒas-EＲK和PI3K-Akt信號通路［6，17-18］。我們設(shè)想，除了抑制激活突變SHP-2的功能外，抑制Gab2的功能有可能減輕SHP-2激活突變導(dǎo)致的髓系異常增殖。為此，我們建立了SHP-2+/+、Gab2－/－、SHP-2D61G/+和SHP-2D61G/+/Gab2－/－4種基因型小鼠，觀察模型小鼠髓系增殖情況，果然發(fā)現(xiàn)SHP-2D61G/+/G

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 霍寅萍;儲著朗;余科科;鄭紅;瞿成奎;汪思應(yīng);;SHP-2酪氨酸磷酸酶激活突變的肥大細(xì)胞對IL3呈高增殖敏感性[J];安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2010年05期

2 張薇;楊金蓮;胡中倩;盧艷敏;儲著朗;余科科;瞿成奎;汪思應(yīng);;SHP-2酪氨酸磷酸酶激活突變導(dǎo)致小鼠髓系異常增殖[J];中國病理生理雜志;2011年04期

【共引文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 胡中倩;汪心怡;李菲菲;儲著朗;邢小翠;李娟;查欣;瞿成奎;汪思應(yīng);;SHP-2酪氨酸磷酸酶野生、突變型真核表達(dá)載體構(gòu)建及其表達(dá)產(chǎn)物磷酸酶活性檢測[J];安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2012年07期

2 張薇;楊金蓮;胡中倩;盧艷敏;儲著朗;余科科;瞿成奎;汪思應(yīng);;SHP-2酪氨酸磷酸酶激活突變導(dǎo)致小鼠髓系異常增殖[J];中國病理生理雜志;2011年04期

【二級參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

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2 張梅;李菲菲;鄭紅;倪芳;瞿成奎;汪思應(yīng);;SHP-2酪氨酸磷酸酶在DNA損傷性放化療引發(fā)的小鼠骨髓毒中的作用[J];安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2008年05期

3 霍寅萍;儲著朗;余科科;鄭紅;瞿成奎;汪思應(yīng);;SHP-2酪氨酸磷酸酶激活突變的肥大細(xì)胞對IL3呈高增殖敏感性[J];安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2010年05期

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 張薇;楊金蓮;胡中倩;盧艷敏;儲著朗;余科科;瞿成奎;汪思應(yīng);;SHP-2酪氨酸磷酸酶激活突變導(dǎo)致小鼠髓系異常增殖[J];中國病理生理雜志;2011年04期

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相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

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本文編號：2564416