發(fā)布時(shí)間：2019-10-27 17:33

【摘要】：創(chuàng)傷弧菌溶細(xì)胞素(Vibrio vulnificus cytolysin,VVC)氨基酸序列的313-445位(Gi No.M34670)與蓖麻毒素B鏈(Ricinchain B,RTB)的一段高度同源,為類蓖麻毒素�；蚩寺”磉_(dá)創(chuàng)傷弧菌溶細(xì)胞素類蓖麻毒素(rRicin B),Ni2+親和層析法及透析復(fù)性法進(jìn)行純化、復(fù)性。用純化的rRi-cin B免疫日本大耳兔獲得多克隆抗體,兔抗rRicin B多克隆抗體經(jīng)鹽析法、分子篩純化后,得到較純的IgG分子。免疫印跡結(jié)果顯示,抗rRicin B多克隆抗體與純化抗原呈現(xiàn)特異性反應(yīng)條帶。流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示,rRicin B誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡呈劑量依賴關(guān)系,多抗能夠阻斷其細(xì)胞毒性。至此,該工作成功制備了兔抗rRicin B的多克隆抗體,并證明了創(chuàng)傷弧菌溶細(xì)胞素結(jié)構(gòu)基因的類蓖麻毒素功能域具有細(xì)胞毒活性,能誘導(dǎo)Hela細(xì)胞凋亡,且其細(xì)胞毒活性能被其多抗成功阻斷。
【圖文】：

tinducedbyIPTG;3:bacteriainducedbyIPTG;4,5:supernatantandsedimentofthetotalbacteriaultrasound-ed;6:washedinclusionbodyofrRicinB;7:totalbacteriaproteinafterpenetratedthroughthecolumn;8-14:totalbacteriaproteinelutedwith0,20,40,60,80,100,200mmol/Limidazole.圖1SDS-PAGE分析融合蛋白rRicinB的表達(dá)、純化Fig.1AnalysisofexpressionandpurificationofrRicinBbySDS-PAGE1:純化后的rRicinB;2:洗滌后的沉淀;3:蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn)。1:purifiedrRicinBprotein;2:washedinclusionbodyofrRicinB;3:proteinmarker.圖3rRicinB蛋白的Westernblot分析Fig.3IdentificationofexpressionofrRicinBbyWesternblot1:蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn);2:復(fù)性后rRicinB蛋白。1:proteinmarker;2:renaturedrRicinBprotein.圖2SDS-PAGE分析復(fù)性后rRicinB蛋白的純度Fig.2AnalysisofpurificationofrenaturedrRicinBbySDS-PAGE

hroughthecolumn;8-14:totalbacteriaproteinelutedwith0,20,40,60,80,100,200mmol/Limidazole.圖1SDS-PAGE分析融合蛋白rRicinB的表達(dá)、純化Fig.1AnalysisofexpressionandpurificationofrRicinBbySDS-PAGE1:純化后的rRicinB;2:洗滌后的沉淀;3:蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn)。1:purifiedrRicinBprotein;2:washedinclusionbodyofrRicinB;3:proteinmarker.圖3rRicinB蛋白的Westernblot分析Fig.3IdentificationofexpressionofrRicinBbyWesternblot1:蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn);2:復(fù)性后rRicinB蛋白。1:proteinmarker;2:renaturedrRicinBprotein.圖2SDS-PAGE分析復(fù)性后rRicinB蛋白的純度Fig.2AnalysisofpurificationofrenaturedrRicinBbySDS-PAGE
【作者單位】： 溫州醫(yī)學(xué)院檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院;
【基金】：浙江省自然科學(xué)基金(批準(zhǔn)號(hào):Y2090468)資助的課題~~
【分類號(hào)】：R363

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【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2553011