發(fā)布時間：2019-07-24 15:19

【摘要】：近些年,隨著人們對植物多糖研究的不斷深入,其免疫調(diào)節(jié)活性成為研究熱點(diǎn)。樹突狀細(xì)胞(Dendritic cell,DC)是目前所知機(jī)體免疫系統(tǒng)中功能最強(qiáng)的抗原提呈細(xì)胞(APC),它的成熟能啟動特異性免疫應(yīng)答,而DC上的Toll樣受體在此過程中起到至關(guān)重要的作用。本課題組通過實(shí)驗發(fā)現(xiàn),錦燈籠果實(shí)水溶性多糖(PPSB)在白色念珠菌核酸疫苗中發(fā)揮佐劑效應(yīng),且這種免疫增強(qiáng)作用與小鼠骨髓來源樹突狀細(xì)胞(BMDC)表型和功能成熟有關(guān),并初步證明PPSB在BMDC表面的受體為TLR4。本論文以TLR4為研究對象,以DC為切入點(diǎn),研究PPSB的免疫增強(qiáng)作用原理。本論文結(jié)論如下:1.PPSB通過MAPKs及NF-κB信號通路對BMDC發(fā)揮作用本實(shí)驗分離提取C57BL/6小鼠骨髓細(xì)胞,用IL-4、GM-CSF聯(lián)合培養(yǎng)BMDC至第6天,分別用濃度為10μg/ml、30μg/ml、50μg/ml的PPSB處理未成熟的BMDC,以RPMI1640培養(yǎng)基作為空白對照組,Western blot法檢測PPSB對BMDC信號通路的影響。結(jié)果顯示,與空白對照組相比,不同濃度PPSB均能增加MAPKs(包括ERK1/2、JNK、p38)、NF-κB p65及IκBα的磷酸化水平,說明PPSB可以通過活化MAPKs及NF-κB兩條信號通路對BMDC發(fā)揮作用。2.BMDC表面TLR4影響PPSB的免疫增強(qiáng)作用為進(jìn)一步證明PPSB與BMDC表面受體TLR4的作用關(guān)系,本實(shí)驗分離提取TLR4缺陷型及野生型C57BL/10小鼠骨髓細(xì)胞,用IL-4、GM-CSF體外誘導(dǎo)培養(yǎng)BMDC至第6天,分別用濃度為10μg/ml、30μg/ml、50μg/ml的PPSB處理兩種小鼠BMDC,并通過以下兩種方法進(jìn)行分析:(1)通過Western blot法檢測WT和TLR4-/-小鼠樹突狀細(xì)胞MAPKs、NF-κB及IκBα磷酸化情況。研究結(jié)果表明,PPSB可以通過BMDC表面TLR4激活MAPKs和NF-κB信號通路;(2)通過ELISA法檢測PPSB對WT和TLR4-/-小鼠BMDC細(xì)胞因子分泌的影響。結(jié)果證實(shí),PPSB誘導(dǎo)BMDC分泌IL-4、IL-10、IL-12及IL-18與其表面TLR4有關(guān)。綜上所述,BMDC表面TLR4在PPSB免疫增強(qiáng)過程中發(fā)揮重要作用。
【圖文】：

22圖 1 PPSB 對小鼠樹突狀細(xì)胞 MAPKs 信號通路相關(guān)蛋白的影estern blot 定量分析（n=3）Western blot 定量分析（n=3）1/2 Western blot 定量分析（n=3）同字母組別之間代表差異顯著（P＜0.05），標(biāo)記相同字母組別之間代05）。

圖 2 PPSB 對小鼠樹突狀細(xì)胞 NF-κB 信號通路相關(guān)蛋白的影響 p65 Western blot 定量分析（n=3）estern blot 定量分析（n=3）字母組別之間代表差異顯著（P＜0.05），，標(biāo)記相同字母組別之間代表）。B 經(jīng) BMDC 表面 TLR4 發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用DC 表面 TLR4 影響 PPSB 激活 MAPKs 與 NF-κB 信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的研究表明，植物多糖主要通過 TLR4 發(fā)揮作用，而 TLR4員，是最主要的模式識別受體，也是目前備受關(guān)注的受體之TLR4-/-小鼠為實(shí)驗動物分離提取骨髓細(xì)胞，收集未成熟狀態(tài)不同濃度 PPSB、LPS（TLR4 特異性配體）及 PGN（TLR2 特以 RPMI1640 完全培養(yǎng)基作空白對照，通過 Western blot 法檢65 及 IκBα磷酸化情況。PPSB 通過 BMDC 表面 TLR4 激活 MAPKs 信號通路
【學(xué)位授予單位】：東北師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R392

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2518713