發(fā)布時(shí)間：2019-06-06 19:54

【摘要】：目的:旨在可溶性BAFF受體末端加上myc標(biāo)簽,構(gòu)建BCMA-Fc-myc,用于競(jìng)爭(zhēng)ELISA分析BAFF拮抗肽-Fc同BCMA-Fc-myc與BAFF的競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合能力。方法:通過(guò)PCR法獲得BCMA-Fc-Myc基因,進(jìn)而構(gòu)建重組子pET28a-BCMA-Fc-Myc,轉(zhuǎn)入E.coli BL21(DE3)中進(jìn)行融合蛋白的表達(dá)。采用蛋白A凝膠親和柱進(jìn)行純化以及ELISA法檢測(cè)其生物活性。結(jié)果:成功獲得了BCMA-Fc-Myc重組基因和pET28a-BCMA-Fc-Myc重組子。并表達(dá)和純化得該融合蛋白,且其能夠與BAFF特異性結(jié)合。結(jié)合活力呈現(xiàn)劑量依賴性,濃度50ng/μl時(shí),兩者的吸附達(dá)飽和。結(jié)論:此研究表達(dá)的BCMA-Fc-Myc融合蛋白具有結(jié)合BAFF的生物活性,可作為其他融合蛋白競(jìng)爭(zhēng)性ELISA的對(duì)照蛋白,為用于篩選BAFF拮抗肽的競(jìng)爭(zhēng)ELISA實(shí)驗(yàn)平臺(tái)。
[Abstract]:Aim: to construct BCMA-Fc-myc, for competitive ELISA analysis of competitive binding ability of BAFF antagonistic peptide-Fc to BCMA-Fc-myc and BAFF by adding myc label to the end of soluble BAFF receptor. Methods: BCMA-Fc-Myc gene was obtained by PCR, and then the recombinant pET28a-BCMA-Fc-Myc, was constructed and transferred into E.coli BL21 (DE3) for expression of fusion protein. Protein A gel affinity column was used for purification and ELISA assay was used to detect its biological activity. Results: BCMA-Fc-Myc recombinant gene and pET28a-BCMA-Fc-Myc recombinant were successfully obtained. The fusion protein was expressed and purified, and it could specifically bind to BAFF. The binding activity was dose-dependent. At the concentration of 50ng/ 渭 l, the adsorption of the two reached saturation. Conclusion: the BCMA-Fc-Myc fusion protein expressed in this study has the biological activity of binding BAFF, and can be used as the control protein of competitive ELISA of other fusion proteins and as a competitive ELISA experimental platform for screening BAFF antagonistic peptides.
【作者單位】： 天津大學(xué)藥物科學(xué)與技術(shù)學(xué)院;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(“新型BAFF拮抗劑在系統(tǒng)性紅斑狼瘡中治療作用的研究”,81273308)資助~~
【分類號(hào)】：R392.2

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2494558