【摘要】：目的:探討新生期小鼠胰島分離純化方案。方法:采用胰腺局部充盈、膠原酶Ⅴ消化,對比不同消化時間及單純顯微鏡下手挑胰島或Histopaque-1077純化對胰島得率的影響,并通過胰島素/胰高血糖素雙染后流式細(xì)胞術(shù)檢測胰島β和α細(xì)胞構(gòu)成比例。結(jié)果:在1 mg/ml酶濃度下,1周和3周小鼠胰島的最適消化時間分別為23 min(胰島/胰腺38.11±2.78)和25 min(胰島/胰腺66.06±2.61)。1周以直徑50μm胰島居多(P0.01),而3周以50～99μm者居多(P0.01)。單純手挑組胰島得率顯著高于Histopaque-1077純化組(P0.05)。所得胰島存活率和純度均90%,且存在β和α細(xì)胞構(gòu)成比例的動態(tài)變化(P0.05)。結(jié)論:胰腺局部充盈、膠原酶Ⅴ消化后鏡下手挑胰島是一種較好的新生期小鼠胰島分離純化方法,消化時間和純化方法是其重要影響因素。
[Abstract]:Objective: to explore the isolation and purification scheme of neonatal mouse islets. Methods: pancreatic local filling and collagenase V digestion were used to compare the effects of different digestion time and simple microscope selection or Histopaque-1077 purification on islet yield. The proportion of islet 尾 and 偽 cells was detected by flow cytometry after insulin / glucagon double staining. Results: at the concentration of 1 mg/ml, The optimum digestion time of islets in 1 week and 3 weeks was 23 min (islet / pancreas 38.11 鹵2.78) and 25 min (islet / pancreas 66.06 鹵2.61), respectively. In the third week, 50 ~ 99 渭 m was the most common (P 0.01). The islet yield in the simple hand selection group was significantly higher than that in the Histopaque-1077 purified group (P 0.05). The survival rate and purity of islets were 90%, and there were dynamic changes in the proportion of 尾 and 偽 cells (P 0.05). Conclusion: local filling of pancreas and endoscopic selection of islets after digestion of collagenase V is a good method for isolation and purification of islet in neonatal mice, and digestion time and purification method are important influencing factors.
【作者單位】： 南京醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院內(nèi)分泌科;
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助(30971404,81070621,81261120566) 江蘇省國際科技合作計(jì)劃(BZ2011042) 江蘇省醫(yī)學(xué)重點(diǎn)人才項(xiàng)目(RC2011068) 江蘇省“六大人才高峰”項(xiàng)目(蘇人社發(fā)【2011】582號)
【分類號】：R-331

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