發(fā)布時(shí)間：2019-04-18 06:19

【摘要】：[背景與目的]條件化恐懼動(dòng)物模型已經(jīng)成為研究情緒學(xué)習(xí)記憶的經(jīng)典工具,視覺剝奪后出現(xiàn)的跨感覺通道行為代償成為神經(jīng)科學(xué)領(lǐng)域研究的焦點(diǎn),目前大量研究已經(jīng)證實(shí)以視覺作為主要感覺通道參與認(rèn)知的靈長(zhǎng)類視覺剝奪后,次要感覺通道行為能力代償性提高,通過觸覺、聽覺等完善視覺欠缺的功能。但是鼠類等嚙齒類動(dòng)物則以聽覺和嗅覺為主,視覺為輔的模式參與認(rèn)知活動(dòng),對(duì)于以聽覺為優(yōu)勢(shì)感覺通道視覺剝奪后的“視-聽”跨感覺模式行為代償是否存在有待研究。學(xué)者們對(duì)于聽覺線索性條件化恐懼情緒的建立及消退的影響因素做了大量研究,但都基于視覺功能正常的情況,對(duì)于跨感覺通道信息加工與條件化恐懼情緒建立和消退之間的關(guān)系卻未見報(bào)道。基于以上原因,本實(shí)驗(yàn)以視覺剝奪的opn-/-;rd1/rd1小鼠作為動(dòng)物模型,旨在探討視覺剝奪和正常視覺兩種模式下,跨感覺通道行為代償與條件化恐懼情緒建立及恐懼消退的關(guān)系,為將來(lái)進(jìn)一步研究聽覺跨感覺的認(rèn)知調(diào)節(jié)提供基礎(chǔ)理論依據(jù)。[方法]取健康小鼠8只及Op-/-;rd1/rd1小鼠8只,分為野生組和全盲組,實(shí)驗(yàn)第一天為適應(yīng)期:實(shí)驗(yàn)場(chǎng)景A和實(shí)驗(yàn)場(chǎng)景B各適應(yīng)60分鐘;第二天為恐懼條件化訓(xùn)練期:在實(shí)驗(yàn)場(chǎng)景A中進(jìn)行,聲音刺激30秒配對(duì)足底電擊1秒,重復(fù)呈現(xiàn)5次;第三天為恐懼消退訓(xùn)練期:在場(chǎng)景B中進(jìn)行,聲音刺激10次,無(wú)足底電擊;第四天為恐懼消退檢測(cè)期:在場(chǎng)景B中進(jìn)行,聲音刺激10次,無(wú)足底電擊。Freezeframe系統(tǒng)分析和記錄小鼠僵直的時(shí)間百分比。[結(jié)果]在聽覺條件化恐懼訓(xùn)練期,隨著刺激次數(shù)增加,全盲組與野生組小鼠的僵直水平呈逐漸升高趨勢(shì),全盲組小鼠條件化恐懼訓(xùn)練第五次時(shí)達(dá)最大值,與訓(xùn)練前比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),表明全盲組小鼠能夠建立條件化恐懼情緒;全盲組與野生組小鼠的僵直水平組間及組內(nèi)差異有顯著性(P0.05),組間與組內(nèi)交互作用顯著(P0.05),表明兩組小鼠建立不同程度條件化恐懼情緒;在恐懼消退訓(xùn)練期,全盲組與野生組小鼠的僵直水平組間及組內(nèi)差異顯著(P0.05),全盲組小鼠僵直水平高于野生組,但兩者交互效應(yīng)不顯著(P0.05),表明野生組與全盲組兩組小鼠獲得不同程度條件化恐懼。在恐懼消退檢測(cè)期,全盲組與野生組小鼠的僵直水平都有顯著下降,但全盲組小鼠僵直水平高于野生組,兩組小鼠的僵直水平組間及組內(nèi)差異顯著(P0.05),組間與組內(nèi)交互作用顯著(P0.05),表明野生組和全盲組小鼠獲得不同程度恐懼消退,全盲組小鼠恐懼消退更慢。[結(jié)論]1、視覺剝奪更有利于建立聽覺線索性條件化恐懼情緒。2、線索性條件.化恐懼情緒建立過程中確實(shí)存在跨感覺信息的影響。3、在嚙齒類動(dòng)物中,次要感覺(視覺)喪失后,對(duì)主要感覺(聽覺)存在著激勵(lì)作用,而這種激勵(lì)作用是對(duì)動(dòng)物認(rèn)識(shí)環(huán)境能力的一種修復(fù)作用和代償作用。4、視覺剝奪阻礙了條件化恐懼消退的表達(dá),提示視-聽跨感覺通道模式并不能完全代償學(xué)習(xí)記憶的多系統(tǒng)聯(lián)合作用。5、聽覺線索刺激模式對(duì)條件化恐懼的獲得和消退影響作用不一樣,提示在條件化恐懼及消退情緒建立過程中,兩者可能存在不同的信號(hào)傳導(dǎo)通路。[背景與目的]神經(jīng)干細(xì)胞是細(xì)胞替代治療的理想種子細(xì)胞,干細(xì)胞移植被用于改善神經(jīng)功能的治療和研究一些退行性神經(jīng)系統(tǒng)疾病的發(fā)生機(jī)制。然而,以往的研究主要聚焦于移植的神經(jīng)干細(xì)胞恢復(fù)受損的運(yùn)動(dòng)功能方面,而它是否對(duì)大腦的認(rèn)知功能有影響尚未可知。此外,大量研究提出移植干細(xì)胞通過分化為神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞,以“替代”作用修復(fù)神經(jīng)功能,但對(duì)于是否存在其它作用機(jī)理,如細(xì)胞因子和神經(jīng)生長(zhǎng)因子等的影響知之甚少。針對(duì)目前研究現(xiàn)狀,本實(shí)驗(yàn)通過建立海馬損傷大鼠作為動(dòng)物模型,旨在探討移植的獼猴神經(jīng)干細(xì)胞對(duì)海馬損傷大鼠的空間學(xué)習(xí)能力和空間記憶能力的影響作用。通過以上研究深入了解獼猴神經(jīng)干細(xì)胞對(duì)認(rèn)知功能的影響機(jī)制,為將來(lái)臨床尋求神經(jīng)干細(xì)胞移植治療提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)和理論支持。[方法]1、用自制直流電刺激裝置損毀雙側(cè)背側(cè)海馬,建立海馬損傷大鼠模型。2、用綜合EB和單胚層的方法制備獼猴神經(jīng)干細(xì)胞,并移植入海馬損傷大鼠腦內(nèi)。建立獼猴神經(jīng)干細(xì)胞移植模型。3、應(yīng)用平衡木及抓握檢測(cè),檢測(cè)海馬損傷模型建模情況;用Morris水迷宮檢測(cè)空白對(duì)照組、假手術(shù)組、海馬損傷組、溶劑組及神經(jīng)干細(xì)胞移植組的空間學(xué)習(xí)和記憶能力。4、制備大腦HE切片和應(yīng)用激光共聚焦熒光顯微鏡觀察受損海馬的組織形態(tài)變化,觀察移植的獼猴神經(jīng)干細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化及與宿主腦的關(guān)系。[結(jié)果]1、.平衡木檢測(cè)和抓握檢測(cè)結(jié)果顯示:各處理組組間差異無(wú)顯著性(P0.05),說明海馬損傷模型造模成功。2、Morris水迷宮檢測(cè)結(jié)果顯示;在隱藏平臺(tái)實(shí)驗(yàn)中,隨著實(shí)驗(yàn)時(shí)間的延長(zhǎng),各組平均逃避潛伏期逐漸縮短;與溶劑組和海馬損傷組相比,獼猴NSCs移植組的平均逃避潛伏期在第4-8天明顯降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。在空間探索實(shí)驗(yàn)中,與假手術(shù)組相比,溶劑組和海馬損傷組大鼠穿越平臺(tái)次數(shù)明顯降低,統(tǒng)計(jì)學(xué)有顯著性差異(P0.01);與溶劑組與海馬損傷組相比,獼猴NSCs移植組的穿越平臺(tái)次數(shù)增加,統(tǒng)計(jì)學(xué)有顯著性差異(P0.01);溶劑組與海馬損傷組相比,大鼠穿越平臺(tái)次數(shù)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。在空間探索實(shí)驗(yàn)中,與假手術(shù)組相比,溶劑組與海馬損傷組大鼠穿越平臺(tái)的次數(shù)降低,差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);獼猴NSCs移植組在目標(biāo)象限的游泳時(shí)間百分比與空白對(duì)照組和假手術(shù)組相比并不高,與溶劑組相比,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與假手術(shù)組相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3、HE染色顯示:造模組的大鼠海馬組織結(jié)構(gòu)不完整,主要病變定位于背側(cè)海馬及周圍,錐體細(xì)胞層破壞,細(xì)胞缺失,細(xì)胞層次排列紊亂。激光共聚焦熒光顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn):獼猴NSCs在培養(yǎng)12天后,Nestin染色呈陽(yáng)性,在去分化的條件下,細(xì)胞開始分化表現(xiàn)出絲狀結(jié)構(gòu),并形成神經(jīng)元長(zhǎng)軸突的形態(tài)學(xué)特點(diǎn),βⅢ-tubulin染色呈陽(yáng)性;移植的獼猴神經(jīng)干細(xì)胞大部分生長(zhǎng)良好,部分細(xì)胞在大鼠大腦表面生長(zhǎng)并整合到大腦實(shí)質(zhì)內(nèi)。[結(jié)論]1、海馬損傷模型建模成功。2、移植的獼猴神經(jīng)干細(xì)胞能夠明顯改善海馬損傷大鼠的空間學(xué)習(xí)和記憶能力。3、移植的獼猴神經(jīng)干細(xì)胞能夠穩(wěn)定表達(dá)NSCs標(biāo)記蛋白,大部分細(xì)胞存活并生長(zhǎng)良好,移行到腦表面與大腦皮層整合。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R338

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本文編號(hào)：2459825