【摘要】：鞘脂類中的主要活性分子鞘氨醇1-磷酸(S1P),可通過介導細胞增殖、分化和遷移等發(fā)揮廣泛的生物學功能;同時,S1P可在相關酶的作用下轉變?yōu)槠渌问?本文旨在建立一種簡便的鞘脂類的制備方法,并結合液相串聯(lián)質譜(LC-MS/MS)快速檢測生物樣本中納克水平的鞘脂類化合物.采用甲醇沉淀或經(jīng)典的脂質提取方法獲得鞘脂類化合物,再采用LC-MS/MS在多反應監(jiān)測模式(MRM)下進行定量分析.實驗結果表明,甲醇沉淀法可簡便快捷地獲得血漿或脂蛋白中鞘氨醇類化合物;S1P、二氫鞘氨醇(DH-S1P)和鞘氨醇(SPH)的定量限分別為110.5、215.6和44.3 pg;人血漿中S1P、DH-S1P和SPH的含量分別為257.8±49.4 nmol/L、93.5±17.3 nmol/L和44.6±7.4nmol/L,鞘脂類化合物在人血漿脂蛋白上的分布存在顯著性差異;在ApoE-/-小鼠血漿中S1P、DHS1P和SPH的含量分別為590.1±78.2 nmol/L、197.8±60.6 nmol/L和35.4±16.7 nmol/L;每1×106個人臍靜脈內(nèi)皮細胞(EA.hy926)中,S1P和SPH的含量分別為103.7±21.8 pg和16.3±5.3ng.甲醇沉淀法結合LC-MS/MS可簡便快捷地對血漿和脂蛋白中的鞘脂類化合物進行定量檢測.該方法特別適用于大量生物樣本中鞘脂類的快速定量分析.
[Abstract]:Sphingosine-1-phosphate (S1P), a major active molecule in sphingomyelids, can play a wide range of biological functions by mediating cell proliferation, differentiation and migration, and S1P can be transformed into other forms under the action of related enzymes. The aim of this paper is to establish a simple method for the preparation of ensheathing lipids and to rapidly determine the nath-level sphingolipid compounds in biological samples by liquid phase tandem mass spectrometry (LC-MS/MS). Sphingolipid compounds were obtained by methanol precipitation or classical lipid extraction method. Then LC-MS/MS was used for quantitative analysis under the multi-reaction monitoring mode (MRM). The results showed that the quantitative limits of S1P, dihydrosphingosine (DH-S1P) and sphingosine (SPH) were 110.5215.6 and 44.3 pg;, respectively, and the quantitative limits of S1P, dihydrosphingosine (SPH) and sphingosine were 110.5215.6 and 44.3 pg;, respectively. The contents of S1P, DHS1P and SPH in human plasma were 257.8 鹵49.4 nmol/L,93.5 鹵17.3 nmol/L and 44.6 鹵7.4 nmol / L, respectively. There was significant difference in the distribution of sphingolipids in human plasma lipoproteins. The contents of S1P, DHS1P and SPH in plasma of ApoE-/- mice were 590.1 鹵78.2 nmol/L,197.8 鹵60.6 nmol/L and 35.4 鹵16.7 nmol/L;, respectively. The contents of S1P and SPH in 1 脳 10 6 human umbilical vein endothelial cells (EA.hy926) were 103.7 鹵21.8 pg and 16.3 鹵5.3 ng. Methanol precipitation combined with LC-MS/MS is a simple and rapid method for quantitative determination of sphingolipids in plasma and lipoprotein. This method is especially suitable for rapid quantitative analysis of scabbard lipids in a large number of biological samples.
【作者單位】： 山東省高校動脈粥樣硬化重點實驗室 泰山醫(yī)學院動脈粥樣硬化研究所;
【基金】：國家自然科學基金(No.30971098;No.81070247) 山東省泰山學者崗專項基金(No.ZD056;No.ZD057) 2012泰山醫(yī)學院高層次課題培養(yǎng)計劃項目(No.330033)~~
【分類號】：R341

【參考文獻】

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本文編號：2459420