【摘要】：目的原核表達并純化全長的人精子肌動蛋白樣蛋白7a(ACTL7a)蛋白,檢測主動免疫ACTL7a產生抗精子抗體后小鼠睪丸的損傷情況。方法構建重組表達質粒pET30a-ACTL7a,以重組質粒轉化E.coli Rosseta(DE3),異丙基硫代半乳糖苷(IPTG)誘導目的蛋白表達,通過鎳離子金屬螯合樹脂純化和SDS-PAGE切膠分離目的蛋白,溶膠后以表達的ACTL7a蛋白免疫ICR小鼠。ELISA檢測抗體效價,PAS染色檢測主動免疫后曲細精管的發(fā)育。結果經IPTG誘導,在大腸桿菌中表達出目的蛋白ACTL7a,純化后免疫ICR小鼠,經PAS染色發(fā)現主動免疫ACTL7a的小鼠其睪丸曲細精管出現生精細胞脫落、核凝聚、生精細胞缺如、生精細胞退化等異常的管腔。結論成功構建了ACTL7a基因全長的原核表達載體,經誘導表達和純化獲得高純度的目的蛋白。發(fā)現ACTL7a蛋白主動免疫ICR小鼠產生抗精子抗體后,小鼠睪丸的曲細精管發(fā)生嚴重損傷。
[Abstract]:Aim to express and purify the full-length human sperm actin-like protein 7a (ACTL7a) protein in E. coli and detect the damage of mouse testis after active immunization with ACTL7a to produce anti-sperm antibody. Methods the recombinant expression plasmid pET30a-ACTL7a, was constructed and transformed into E.coli Rosseta (DE3). Isopropyl galactogalactoside (IPTG) was used to induce the expression of the target protein. The target protein was purified by nickel ion metal chelating resin and the target protein was isolated by SDS-PAGE gel digestion. ICR mice were immunized with ACTL7a protein. Elisa was used to detect antibody titer and PAS staining was used to detect the development of seminiferous tubule after active immunization. Results after induced by IPTG, the target protein ACTL7a, expressed in E. coli was purified and then immunized ICR mice. The results of PAS staining showed that the spermatogenic cells in testicular seminiferous tubule of the active immunized ACTL7a mice were exfoliated, the nuclei condensed and the spermatogenic cells were absent. Abnormal lumen such as spermatogenic cell degeneration. Conclusion the prokaryotic expression vector of the full length of ACTL7a gene was successfully constructed, and the high purity target protein was obtained by inducing expression and purification. It was found that the seminiferous tubules of testis of ICR mice were seriously damaged after ACTL7a protein was actively immunized to produce antisperm antibodies.
【作者單位】： 中國醫(yī)學科學院基礎醫(yī)學研究所;北京協(xié)和醫(yī)學院基礎學院生物化學與分子生物學系醫(yī)學分子生物學國家重點實驗室;國家人口和計劃生育委員會科學技術研究所生殖生理學實驗室;
【基金】：國家科技支撐計劃(2012BAI31B08) 國家重點實驗室專項基金(2060204)~~
【分類號】：R363

【共引文獻】

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本文編號：2453803