【摘要】：目的原核表達(dá)并純化全長的人精子肌動蛋白樣蛋白7a(ACTL7a)蛋白,檢測主動免疫ACTL7a產(chǎn)生抗精子抗體后小鼠睪丸的損傷情況。方法構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒pET30a-ACTL7a,以重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化E.coli Rosseta(DE3),異丙基硫代半乳糖苷(IPTG)誘導(dǎo)目的蛋白表達(dá),通過鎳離子金屬螯合樹脂純化和SDS-PAGE切膠分離目的蛋白,溶膠后以表達(dá)的ACTL7a蛋白免疫ICR小鼠。ELISA檢測抗體效價,PAS染色檢測主動免疫后曲細(xì)精管的發(fā)育。結(jié)果經(jīng)IPTG誘導(dǎo),在大腸桿菌中表達(dá)出目的蛋白ACTL7a,純化后免疫ICR小鼠,經(jīng)PAS染色發(fā)現(xiàn)主動免疫ACTL7a的小鼠其睪丸曲細(xì)精管出現(xiàn)生精細(xì)胞脫落、核凝聚、生精細(xì)胞缺如、生精細(xì)胞退化等異常的管腔。結(jié)論成功構(gòu)建了ACTL7a基因全長的原核表達(dá)載體,經(jīng)誘導(dǎo)表達(dá)和純化獲得高純度的目的蛋白。發(fā)現(xiàn)ACTL7a蛋白主動免疫ICR小鼠產(chǎn)生抗精子抗體后,小鼠睪丸的曲細(xì)精管發(fā)生嚴(yán)重?fù)p傷。
[Abstract]:Aim to express and purify the full-length human sperm actin-like protein 7a (ACTL7a) protein in E. coli and detect the damage of mouse testis after active immunization with ACTL7a to produce anti-sperm antibody. Methods the recombinant expression plasmid pET30a-ACTL7a, was constructed and transformed into E.coli Rosseta (DE3). Isopropyl galactogalactoside (IPTG) was used to induce the expression of the target protein. The target protein was purified by nickel ion metal chelating resin and the target protein was isolated by SDS-PAGE gel digestion. ICR mice were immunized with ACTL7a protein. Elisa was used to detect antibody titer and PAS staining was used to detect the development of seminiferous tubule after active immunization. Results after induced by IPTG, the target protein ACTL7a, expressed in E. coli was purified and then immunized ICR mice. The results of PAS staining showed that the spermatogenic cells in testicular seminiferous tubule of the active immunized ACTL7a mice were exfoliated, the nuclei condensed and the spermatogenic cells were absent. Abnormal lumen such as spermatogenic cell degeneration. Conclusion the prokaryotic expression vector of the full length of ACTL7a gene was successfully constructed, and the high purity target protein was obtained by inducing expression and purification. It was found that the seminiferous tubules of testis of ICR mice were seriously damaged after ACTL7a protein was actively immunized to produce antisperm antibodies.
【作者單位】： 中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所;北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)學(xué)院生物化學(xué)與分子生物學(xué)系醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;國家人口和計(jì)劃生育委員會科學(xué)技術(shù)研究所生殖生理學(xué)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：國家科技支撐計(jì)劃(2012BAI31B08) 國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室專項(xiàng)基金(2060204)~~
【分類號】：R363

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本文編號：2453803