【摘要】：間充質干細胞(Mesenchymal stem cells, MSCs)是干細胞家族中具有多向分化潛能以及自我更新能力的成體干細胞。自2002年Woodbury等人首次報道將骨髓MSCs體外誘導分化成神經元以來,目前體外誘導MSCs分化成神經元細胞有4種方法：抗氧化劑誘導、細胞因子誘導、中藥誘導以及基因編輯誘導。如何使MSCs分化而來的類神經元細胞具有神經細胞的特性,是我們探究的方向。Ω-3及Ω-6族多不飽和脂肪酸(polyunsaturated fatty acid, PUFA)及其代謝產物與細胞結構及功能有關,它們可以通過多種作用機制,促進干細胞的增殖與分化,繼而影響干細胞的命運。我們的實驗在人臍帶間充質干細胞(Human umbilical cord mesenchymal stem cells, hUC-MSCs)神經分化培養(yǎng)體系中增補PUFA,包括二十碳五烯酸(Eicosapentaenoic acid, EPA)及二十二碳五烯酸(Docosapentenoic acid, DPA), MTS assay以及Transwell遷移實驗結果表明,EPA和DPA可以促進hUC-MSCs的增殖、遷移；而qRT-PCR以及免疫細胞化學檢測表明,增補EPA和DPA后hUC-MSCs分化的類神經元細胞中多種神經元特異性標記的表達高于未增補PUFA的對照組,包括膠質纖維酸性蛋白(Glial fibrillary acidic protein,GFAP)、神經絲蛋白(Neurofilament, NF)、酪氨酸羥化酶(Tyrosine-hydroxylase,TH)、神經元核抗原(Neuronal nuclear antigen, NeuN)、神經元特異性稀醇化酶(Neuron-specific enolase, NES)以及微管結合蛋白2(Microtubule associated protein 2, MAP2)等。這一結果顯示EPA和DPA參與hUC-MSCs增殖、遷移及神經分化。本實驗的研究成果有望用于細胞替代治療中,多不飽和脂肪酸增補培養(yǎng)hUC-MSCs后,分化成可行使功能的神經細胞,替代引起病變的已壞死的神經細胞,以達到減緩或治愈神經退行性疾病的目的。
[Abstract]:Mesenchymal stem cells (Mesenchymal stem cells, MSCs) are adult stem cells with multi-directional differentiation potential and self-renewal ability in stem cell family. Since Woodbury and others first reported the differentiation of bone marrow MSCs into neurons in vitro, there are four methods to induce MSCs to differentiate into neurons in vitro: antioxidant induction, cytokine induction, traditional Chinese medicine induction and gene editing induction. How to make the neuron-like cells differentiated from MSCs have the characteristics of neural cells is the research direction. 惟-3 and 惟-6 polyunsaturated fatty acids (polyunsaturated fatty acid, PUFA) and their metabolites are related to the structure and function of cells. They can promote the proliferation and differentiation of stem cells through a variety of mechanisms, and then affect the fate of stem cells. In our experiment, we added PUFA, to the neural differentiation culture system of human umbilical cord mesenchymal stem cells (Human umbilical cord mesenchymal stem cells, hUC-MSCs), including eicosapentaenoic acid (Eicosapentaenoic acid, EPA) and 22 carbapentaenoic acid (Docosapentenoic acid, DPA),). The results of MTS assay and Transwell migration showed that EPA and DPA could promote the proliferation and migration of hUC-MSCs. The results of qRT-PCR and immunocytochemistry showed that the expression of many neuron specific markers in hUC-MSCs differentiated neuron cells supplemented with EPA and DPA was higher than that in the control group without PUFA, including glial fibrillary acidic protein (Glial fibrillary acidic protein,. GFAP), neurofilament protein (Neurofilament, NF), tyrosine hydroxylase (Tyrosine-hydroxylase,TH), neuronal nuclear antigen (Neuronal nuclear antigen, NeuN), neuron specific dilute alcoholase (Neuron-specific enolase, NES) and tubulin binding protein 2 (Microtubule associated protein 2, MAP2, etc. These results suggest that EPA and DPA are involved in the proliferation, migration and neural differentiation of hUC-MSCs. The results of this study are expected to be used in cell replacement therapy. After adding polyunsaturated fatty acids to cultured hUC-MSCs, polyunsaturated fatty acids can differentiate into functional nerve cells and replace necrotic neurons that cause pathological changes. In order to alleviate or cure neurodegenerative diseases.
【學位授予單位】：內蒙古大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R329.2

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