【摘要】：第一部分:BO小鼠模型的建立閉塞性細(xì)支氣管炎(BO)是呼吸系統(tǒng)一種少見(jiàn)且病情較為嚴(yán)重的小氣道阻塞性疾病。臨床上以咳嗽、喘息、活動(dòng)后呼吸困難為特點(diǎn),病理上主要表現(xiàn)為小氣道及其周圍組織的炎癥及纖維化,進(jìn)而導(dǎo)致管腔狹窄和/或完全閉塞。BO可繼發(fā)于重癥下呼吸道感染、移植、有毒氣體吸入、藥物、結(jié)締組織病等多種情況,可以說(shuō)是多種原因引起的嚴(yán)重下呼吸道損傷的一種終末狀態(tài)。然而,目前為止BO的發(fā)病機(jī)制尚未闡明,亦無(wú)有效的治療方案,一旦患病,往往呈不可逆的臨床經(jīng)過(guò),給患者、家庭和社會(huì)造成巨大困擾。因此,進(jìn)一步闡明BO的機(jī)制,尋找有效的治療措施具有重要醫(yī)學(xué)和社會(huì)意義。適宜的動(dòng)物模型是疾病機(jī)制研究的重要手段。目前針對(duì)BO的基礎(chǔ)研究多采用移植后BO動(dòng)物模型做為研究對(duì)象,包括同種異體原位肺/氣管移植,異位氣管移植(如大網(wǎng)膜下、皮下、肺內(nèi))等。移植后BO模型的建立對(duì)闡明BO發(fā)病機(jī)制中的免疫機(jī)制具有重要作用,但BO其他方面發(fā)病機(jī)制往往被此種模型過(guò)強(qiáng)的免疫反應(yīng)所掩蓋。因此,開(kāi)發(fā)一種簡(jiǎn)單可靠的非移植后BO動(dòng)物模型對(duì)深入探索非移植因素導(dǎo)致的BO的發(fā)病機(jī)理具有重要意義。硝酸溶液是一種具有腐蝕性的強(qiáng)氧化劑,既往研究顯示硝酸氣道注入后可以嚴(yán)重灼傷氣道粘膜,誘發(fā)BO。小鼠價(jià)格較低廉、繁殖周期短、易于飼養(yǎng)和操作、與人類基因組具有高度同源性,并具備大量商業(yè)化抗體和成熟的基因修飾技術(shù)。作為機(jī)制研究的載體,小鼠具有其他實(shí)驗(yàn)動(dòng)物無(wú)法比擬的優(yōu)勢(shì)。由此,本研究第一部分致力于開(kāi)發(fā)一種硝酸誘發(fā)的小鼠BO模型。我們通過(guò)空氣壓縮霧化泵,將10%硝酸溶液轉(zhuǎn)化為直徑3-5微米的氣霧狀態(tài),并將實(shí)驗(yàn)組小鼠暴露于硝酸氣霧劑中持續(xù)吸入3小時(shí)。對(duì)照組則采用蒸餾水替代硝酸溶液。結(jié)果發(fā)現(xiàn),實(shí)驗(yàn)組小鼠很快出現(xiàn)了氣促、呼吸困難、發(fā)紺等乏氧癥狀,毛發(fā)卷曲、晦暗無(wú)光,活動(dòng)減少,體重進(jìn)行性下降。分別采用無(wú)創(chuàng)和有創(chuàng)小動(dòng)物肺功能儀檢測(cè)增強(qiáng)呼氣間歇(Penh)、每分通氣量(MV)、吸氣峰流量(PIF)、呼氣峰流量(PEF)、肺阻力(RL)和動(dòng)態(tài)肺順應(yīng)性(Cdyn)。結(jié)果實(shí)驗(yàn)組小鼠Penh明顯增高,MV、PIF、PEF明顯降低,RL顯著增高而Cdyn明顯減低。臨床癥狀和肺功能改變符合BO特點(diǎn)。以上表現(xiàn)在吸入后1周內(nèi)最為嚴(yán)重,死亡率達(dá)18.67%。一周之后,上述癥狀逐漸減輕,直至與對(duì)照組相比無(wú)明顯差異。與此同時(shí),我們進(jìn)行了小鼠支氣管肺泡灌洗液(BALF)細(xì)胞計(jì)數(shù)和分類。結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)組小鼠吸入后1周內(nèi),氣道炎癥滲出明顯,各類炎癥細(xì)胞(中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞)均顯著增高。肺組織HE染色顯示:實(shí)驗(yàn)組小鼠吸入后第3天、第7天主要表現(xiàn)為呈灶狀分布的急性壞死性細(xì)支氣管炎的病理改變(氣道上皮細(xì)胞壞死脫落,氣道完整性被破壞,大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)至細(xì)支氣管管腔及細(xì)支氣管周邊區(qū)域,周圍肺泡充血水腫,伴遠(yuǎn)端肺實(shí)質(zhì)不張);吸入后第14天,可見(jiàn)細(xì)支氣管周圍膠原沉積;吸入后第28天、56天,可見(jiàn)典型的BO病理改變(細(xì)支氣管管腔迂曲變形、上皮細(xì)胞層折疊、管腔狹窄、管壁增厚及纖維化形成,周圍小動(dòng)脈管壁增厚、管腔變狹窄)。此外,我們檢測(cè)了小鼠BALF和肺組織勻漿中基質(zhì)金屬蛋白酶-2、9,金屬蛋白酶組織抑制劑-1,8-異構(gòu)前列腺素和髓過(guò)氧化物酶的表達(dá)水平,結(jié)果發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)組小鼠上述檢測(cè)指標(biāo)在不同時(shí)間點(diǎn)均存在不同程度增高,提示組織的不當(dāng)修復(fù)和氧化應(yīng)激可能參與了BO的發(fā)病。綜上所述,在這部分實(shí)驗(yàn)中,我們通過(guò)霧化吸入硝酸溶液的方式建立了一種簡(jiǎn)單易行且經(jīng)濟(jì)可靠的非移植后小鼠BO模型。除了BO的病理特征,我們還在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物上獲得了BO的臨床表現(xiàn)、氣道炎癥特點(diǎn)、肺功能改變,以及一些重要因子在BO病程中的變化趨勢(shì)�；谛∈筮@種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的優(yōu)越性及建模方法的可行性,這一模型或?qū)⒊蔀锽O機(jī)制研究的有利工具,廣泛應(yīng)用于BO日后的研究工作中。第二部分:兒童感染后BO的前瞻性分析在兒童,BO主要由感染誘發(fā),又稱感染后BO(PIBO)。最常見(jiàn)的病原為腺病毒,其次還包括呼吸道合胞病毒、麻疹病毒、肺炎支原體等。PIBO主要表現(xiàn)為重癥下呼吸道感染后持續(xù)咳嗽、喘息、呼吸困難,運(yùn)動(dòng)耐受性差,肺部喘鳴音和細(xì)濕Up音。肺高分辨CT(HRCT)可見(jiàn)馬賽克灌注征、細(xì)支氣管壁增厚、呼氣相氣體潴留等征象。肺功能表現(xiàn)為固定的阻塞性通氣功能障礙,肺順應(yīng)性下降。兒童PIBO缺乏特異有效的治療方案,預(yù)后不良。目前經(jīng)驗(yàn)用藥主要包括小劑量阿奇霉素、激素、急性感染時(shí)支氣管擴(kuò)張劑的應(yīng)用,然而病情改善并不顯著。為進(jìn)一步了解兒童PIBO的臨床特征和評(píng)估目前常用治療方案的療效,本部分研究前瞻性分析了2011年1月——2015年12月期間在吉林大學(xué)第一醫(yī)院小兒呼吸一科確診為PIBO的42例病例的臨床特征、影像學(xué)特點(diǎn)、肺功能變化、治療反應(yīng)及預(yù)后。結(jié)果提示:腺病毒和肺炎支原體引起的重癥下呼吸道感染可能是中國(guó)大陸地區(qū)PIBO發(fā)病的高危因素,男性患兒和農(nóng)村患兒居多,根據(jù)典型病史、HRCT征象和肺功能檢測(cè)結(jié)果可對(duì)絕大多數(shù)患兒做出及時(shí)正確的臨床診斷。在短期內(nèi),肺功能較HRCT對(duì)PIBO患兒的病情評(píng)估更具優(yōu)勢(shì)�？诜に�+口服阿奇霉素+霧化吸入糖皮質(zhì)激素或?qū)?duì)PIBO的病情改善起到一定作用。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R725.6;R-332

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本文編號(hào)：2418140