【摘要】：【目的】建立鳥分枝桿菌感染巨噬細(xì)胞模型,探討Toll樣受體2(TLR2)和Toll樣受體6(TLR6)在鳥分枝桿菌誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞凋亡中的作用,為闡明鳥分枝桿菌致病機(jī)制提供依據(jù)。【方法】用鳥分枝桿菌感染U937細(xì)胞,于感染0h、8h、16h、24h和48h后分別提取細(xì)胞總蛋白,并通過(guò)Western blot方法檢測(cè)TLR2和TLR6的表達(dá);分別提取細(xì)胞培養(yǎng)上清液,利用ELISA技術(shù)檢測(cè)腫瘤壞死因子(TNF-α)含量的變化情況。用鳥分枝桿菌感染阻斷TLR2和TLR6后的U937細(xì)胞,通過(guò)Western blot方法分別檢測(cè)其促凋亡因子BAX和抗凋亡因子BCL-2的表達(dá)量,用ELISA技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清液中TNF-α含量變化情況,用流式細(xì)胞儀檢測(cè)U937細(xì)胞的凋亡變化。【結(jié)果】鳥分枝桿菌感染U937細(xì)胞可引起TLR2、TLR6和TNF-α表達(dá)上調(diào);用鳥分枝桿菌感染阻斷TLR2和TLR6后的U937細(xì)胞,可使U937細(xì)胞內(nèi)促凋亡因子BAX和TNF-α表達(dá)量下降(P0.05),抗凋亡因子BCL-2表達(dá)量升高(P0.05),并可以明顯降低感染鳥分枝桿菌后的細(xì)胞的凋亡率(P0.05)�！窘Y(jié)論】TLR2和TLR6與巨噬細(xì)胞凋亡相關(guān),巨噬細(xì)胞通過(guò)TLR2和TLR6來(lái)識(shí)別鳥分枝桿菌,而鳥分枝桿菌反過(guò)來(lái)通過(guò)促進(jìn)TLR2和TLR6的表達(dá)來(lái)影響巨噬細(xì)胞相關(guān)凋亡通路,從而誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞凋亡。
[Abstract]:[objective] to study the role of Toll like receptor 2 (TLR2) and Toll like receptor 6 (TLR6) in inducing macrophage apoptosis induced by Mycobacterium avium. [methods] U937 cells were infected with Mycobacterium avium. The total protein was extracted from U937 cells at 0 h, 8 h, 16 h and 48 h after infection, and the expression of TLR2 and TLR6 was detected by Western blot method. The supernatant of cell culture was extracted, and the content of tumor necrosis factor (TNF- 偽) was detected by ELISA technique. U937 cells of TLR2 and TLR6 were blocked by Mycobacterium avium infection. The expression of BAX and BCL-2 were detected by Western blot, and the content of TNF- 偽 in the supernatant of cell culture was detected by ELISA technique. The apoptosis of U937 cells was detected by flow cytometry. [results] the expression of TLR2,TLR6 and TNF- 偽 was up-regulated in U937 cells infected by Mycobacterium avium. When U937 cells were blocked by Mycobacterium avium infection, the expression of pro-apoptotic factor BAX and TNF- 偽 in U937 cells decreased (P0.05), and the expression of anti-apoptotic factor BCL-2 increased (P0.05). TLR2 and TLR6 were associated with macrophage apoptosis. Macrophages recognized Mycobacterium avium by TLR2 and TLR6, and the apoptosis rate of mycobacterium avium was significantly decreased after infection (P0.05). [conclusion] TLR2 and TLR6 are associated with macrophage apoptosis, and macrophages recognize Mycobacterium avium by TLR2 and TLR6. On the other hand, Mycobacterium avium can induce macrophage apoptosis by promoting the expression of TLR2 and TLR6.
【作者單位】： 廣西醫(yī)科大學(xué)廣西高校生物分子醫(yī)學(xué)研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室生物化學(xué)與分子生物學(xué)教研室
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(81260245) 廣西自然科學(xué)基金項(xiàng)目(2015GXNSFAA139077)資助
【分類號(hào)】：R378.91

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本文編號(hào)：2344043