發(fā)布時(shí)間：2018-10-21 10:51

【摘要】：第一部分人類胚胎形態(tài)學(xué)分型與線粒體拷貝數(shù)、胚胎直徑、膜電位及分布關(guān)系的研究目的：線粒體作為胚胎發(fā)育所需能量的供應(yīng)源,所提供的能量直接影響著胚胎發(fā)育的潛能及胚胎的質(zhì)量。本研究主要探討人類不同時(shí)期及相同時(shí)期不同形態(tài)學(xué)分型的胚胎與自身線粒體拷貝數(shù)、胚胎直徑、膜電位及分布的關(guān)系及對(duì)胚胎發(fā)育的影響。方法：選擇行IVF-ET不孕患者新鮮周期卵母細(xì)胞正常受精后發(fā)育較差不適合移植的胚胎152枚,和助孕成功妊娠后自愿丟棄的冷凍胚胎305枚。對(duì)于冷凍的胚胎要進(jìn)行解凍復(fù)蘇,培養(yǎng)2h后放置倒置顯微鏡下觀察、拍照并進(jìn)行胚胎形態(tài)學(xué)的分期、分級(jí)評(píng)分,把相同時(shí)期評(píng)分相同的胚胎分成一組。根據(jù)胚胎發(fā)育時(shí)期不同,將所有冷凍胚胎分成D3冷凍胚胎組(卵裂期胚胎n=144)及D5冷凍胚胎組(囊胚n=161)。根據(jù)同濟(jì)生殖中心胚胎培養(yǎng)室的胚胎評(píng)分標(biāo)準(zhǔn),將卵裂期胚胎分為優(yōu)質(zhì)胚胎組(n=89)、非優(yōu)質(zhì)胚胎組(n=55)和新鮮胚胎組(不能移植的胚胎n=152),將冷凍囊胚分為優(yōu)質(zhì)囊胚組(n=101)和非優(yōu)質(zhì)囊胚組(n=60)。采用Real-time PCR檢測(cè)單個(gè)胚胎mtDNA拷貝數(shù)、熒光探針JC-10檢測(cè)胚胎線粒體△Ψm,熒光探針Mito Tracker Green對(duì)胚胎進(jìn)行染色觀察線粒體的分布。比較不同階段胚胎和相同階段不同質(zhì)量的胚胎與mtDNA拷貝數(shù)、胚胎直徑、△甲m及線粒體分布的差異。結(jié)果：1、D3冷凍胚胎組mtDNA拷貝數(shù)明顯低于D5冷凍胚胎組(P0.05);新鮮胚胎組mtDNA拷貝數(shù)明顯低于D3冷凍優(yōu)質(zhì)胚胎組和D3冷凍非優(yōu)質(zhì)胚胎組(P0.05),而D3冷凍優(yōu)質(zhì)胚胎組mtDNA拷貝數(shù)與非優(yōu)質(zhì)胚胎組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；D5冷凍優(yōu)質(zhì)囊胚組mtDNA拷貝數(shù)明顯高于非優(yōu)質(zhì)囊胚組(P0.05)。2、D3冷凍胚胎組直徑明顯低于D5冷凍胚胎組(P0.01),D3冷凍優(yōu)質(zhì)胚胎組直徑與非優(yōu)質(zhì)胚胎組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,D5冷凍優(yōu)質(zhì)囊胚組直徑明顯高于非優(yōu)質(zhì)囊胚組(P0.05)。3、D3冷凍胚胎組線粒體△Ψm明顯低于D5冷凍胚胎組(P0.05),新鮮胚胎組線粒體△Ψm明顯低于D3冷凍優(yōu)質(zhì)胚胎組和D3冷凍非優(yōu)質(zhì)胚胎組(P0.01,P0.05),D3冷凍優(yōu)質(zhì)胚胎組線粒體△Ψm高于非優(yōu)質(zhì)胚胎組(P0.05),D5冷凍優(yōu)質(zhì)囊胚組線粒體△Ψm明顯高于非優(yōu)質(zhì)囊胚組(P0.01)。4、D3冷凍優(yōu)質(zhì)胚胎組的線粒體均勻分布于每個(gè)卵裂球內(nèi),且染色均勻：而D3冷凍非優(yōu)質(zhì)胚胎組線粒體不均勻的分布在卵裂球內(nèi),且卵裂球染色不均勻；新鮮胚胎組的線粒體彌散在胞質(zhì)內(nèi),且呈不均勻分布；D5冷凍優(yōu)質(zhì)囊胚組線粒體主要密集在內(nèi)細(xì)胞團(tuán)核周?chē)^寬的區(qū)域,染色較深且均勻,而D5冷凍非優(yōu)質(zhì)囊胚組線粒體主要彌散在內(nèi)細(xì)胞團(tuán)核周?chē)?染色較淺且不均勻。結(jié)論：1、隨著胚胎的不斷發(fā)育mtDNA拷貝數(shù)是逐漸增高,質(zhì)量越好胚胎mtDNA拷貝數(shù)越高。2、D5冷凍胚胎組胚胎形態(tài)學(xué)分型越好的胚胎直徑越大,mtDNA拷貝數(shù)與胚胎直徑呈正相關(guān)。3、隨著胚胎的不斷發(fā)育mt△ψm是逐漸增高,質(zhì)量越好的胚胎△Ψm越高。4、線粒體均勻的分布在卵裂球和內(nèi)細(xì)胞團(tuán)核周?chē)^寬的區(qū)域,胚胎有較好的發(fā)育潛能。第二部分人類胚胎形態(tài)學(xué)分型與胚胎內(nèi)ATP、ROS及Ca2+水平關(guān)系的研究目的：ATP是卵母細(xì)胞成熟、受精及胚胎發(fā)育的能量保證,ROS是胚胎內(nèi)重要的氧化還原信號(hào)分子,Ca2+是胚胎代謝活動(dòng)中重要的第二信使,三者均是線粒體的產(chǎn)物并存在密切的相互作用,并通過(guò)作用于線粒體而參與胚胎內(nèi)細(xì)胞的增殖、分化和凋亡過(guò)程。本研究主要探討人類不同時(shí)期及相同時(shí)期不同形態(tài)學(xué)分型的胚胎與胚胎內(nèi)ATP、ROS和Ca2+水平的關(guān)系及對(duì)胚胎發(fā)育的影響。方法：選擇行IVF-ET不孕患者新鮮周期卵母細(xì)胞正常受精后發(fā)育較差不適合移植的胚胎152枚,和助孕成功妊娠后自愿丟棄的冷凍胚胎305枚。對(duì)于冷凍的胚胎要進(jìn)行解凍復(fù)蘇,培養(yǎng)2h后放置倒置顯微鏡下觀察、拍照并進(jìn)行胚胎形態(tài)學(xué)的分期、分級(jí)評(píng)分,把相同時(shí)期評(píng)分相同的胚胎分成一組。根據(jù)胚胎發(fā)育時(shí)期不同,將所有冷凍胚胎分成D3冷凍胚胎組(卵裂期胚胎n=144)及D5冷凍胚胎組(囊胚n=161)。根據(jù)同濟(jì)生殖中心胚胎培養(yǎng)室的胚胎評(píng)分標(biāo)準(zhǔn),將卵裂期胚胎分為優(yōu)質(zhì)胚胎組(n=89)、非優(yōu)質(zhì)胚胎組(n=55)和新鮮胚胎組(不能移植的胚胎n=152),將冷凍囊胚分為優(yōu)質(zhì)囊胚組(n=101)和非優(yōu)質(zhì)囊胚組(n=60)。采用熒光素酶法檢測(cè)單個(gè)胚胎ATP水平,活性氧檢測(cè)試劑盒檢測(cè)胚胎內(nèi)ROS的水平,鈣離子熒光探針檢測(cè)胚胎內(nèi)Ca2+水平,比較不同階段胚胎和相同階段不同質(zhì)量的胚胎與胚胎內(nèi)ATP、ROS及Ca2+水平的差異。結(jié)果：1、D3冷凍胚胎組線粒體ATP明顯低于D5冷凍胚胎組(P0.05),新鮮胚胎組線粒體ATP低于D3冷凍優(yōu)質(zhì)胚胎組和D3冷凍非優(yōu)質(zhì)胚胎組(P0.05),D3冷凍優(yōu)質(zhì)胚胎組線粒體ATP高于非優(yōu)質(zhì)胚胎組(P0.05),D5冷凍優(yōu)質(zhì)囊胚組線粒體ATP明顯高于非優(yōu)質(zhì)囊胚組(P0.05)。2、D3冷凍胚胎組線粒體ROS明顯低于D5冷凍胚胎組(P0.05),新鮮胚胎組線粒體ROS高于D3冷凍優(yōu)質(zhì)胚胎組和D3冷凍非優(yōu)質(zhì)胚胎組(P0.01,P0.05),D3凍胚優(yōu)質(zhì)胚胎組線粒體ROS低于非優(yōu)質(zhì)胚胎組(P0.05),D5凍胚優(yōu)質(zhì)囊胚組線粒體ROS低于非優(yōu)質(zhì)囊胚組(P0.05)。3、D3冷凍胚胎組線粒體Ca2+明顯低于D5冷凍胚胎組(P0.05),新鮮胚胎組線粒體Ca2+高十D3冷凍優(yōu)質(zhì)胚胎組和D3冷凍非優(yōu)質(zhì)胚胎組(P0.01,P0.05),D3凍胚優(yōu)質(zhì)胚胎組線粒體Ca2+低于非優(yōu)質(zhì)胚胎組(P0.05),D5凍胚優(yōu)質(zhì)囊胚組線粒體Ca2+低于非優(yōu)質(zhì)胚胎組(P0.05)。結(jié)論：1、隨著胚胎的發(fā)育胚胎內(nèi)ATP水平逐漸增高,胚胎內(nèi)ATP水平越高胚胎質(zhì)量及發(fā)育潛能越好。2、胚胎內(nèi)ROS和Ca2+水平越高,胚胎質(zhì)量越差,甚至引起胚胎凋亡。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R321

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本文編號(hào)：2284877