【摘要】：利用PCR擴(kuò)增出鼠傷寒沙門氏菌鞭毛蛋白基因fliC,連接到原核表達(dá)載體pET28a(+)上,測(cè)序鑒定后轉(zhuǎn)化至大腸桿菌BL21(DE3)pLysS感受態(tài)細(xì)胞中,構(gòu)建了原核表達(dá)系統(tǒng)。經(jīng)1mmol/L異丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)誘導(dǎo)及Ni-NTA純化后,得到了帶6×His純化標(biāo)簽的分子質(zhì)量大小約為54.6kD的表達(dá)產(chǎn)物,和預(yù)測(cè)蛋白大小一致,且大部分表達(dá)產(chǎn)物以可溶形式存在利用Western-blotting進(jìn)一步鑒定,結(jié)果表明,該蛋白能與抗His標(biāo)簽的單抗發(fā)生特異性反應(yīng)。用純化的融合蛋白免疫BALB/c小鼠,獲得多克隆抗體,并對(duì)抗血清的效價(jià)和特異性進(jìn)行檢測(cè),結(jié)果表明,多抗的效價(jià)較高,特異性較好。
[Abstract]:The flagellin gene fliC, of Salmonella typhimurium was amplified by PCR and ligated to the prokaryotic expression vector pET28a (). It was sequenced and transformed into E. coli BL21 (DE3) pLysS competent cells, and the prokaryotic expression system was constructed. After induced by 1mmol/L isopropyl- 尾 -D-thiogalactoside (IPTG) and purified by Ni-NTA, the molecular weight of the purified label with 6 脳 His was about the expression product of 54.6kD, which was consistent with the predicted protein size. Most of the expressed products were further identified by Western-blotting in soluble form. The results showed that the protein could react specifically with the monoclonal antibody against His tag. The purified fusion protein was used to immunize BALB/c mice. The polyclonal antibody was obtained and the titer and specificity of the antiserum were detected. The results showed that the polyclonal antibody had higher titer and better specificity.
【作者單位】： 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與檢測(cè)技術(shù)研究所農(nóng)業(yè)部農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;南京農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科技學(xué)院肉品加工與質(zhì)量控制教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;中國(guó)檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院;
【基金】：國(guó)家現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)專項(xiàng)(CARS-42) 國(guó)家自然科學(xué)青年基金項(xiàng)目(31000799) “十二五”國(guó)家科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目(2012BAD28B03)
【分類號(hào)】：R378

【參考文獻(xiàn)】

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1 劉家發(fā);朱建如;;食品安全存在的問題及對(duì)策[J];公共衛(wèi)生與預(yù)防醫(yī)學(xué);2005年06期

2 吉清,何鳳田;包涵體復(fù)性的研究進(jìn)展[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).臨床生物化學(xué)與檢驗(yàn)學(xué)分冊(cè);2004年06期

3 高艷,陳雪梅,吳愛群;增強(qiáng)型綠色熒光蛋白原核表達(dá)純化與多克隆抗體的制備[J];鄭州大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2003年03期

4 李楊;鞠玉琳;王曉波;劉挺;;中藥“連黃”對(duì)耐藥沙門氏菌抑制作用的研究[J];吉林畜牧獸醫(yī);2007年09期

5 曹軍平，焦新安，張如寬，高崧，，文其乙，劉秀梵;沙門氏菌鞭毛蛋白屬共同抗原表位的定位[J];江蘇農(nóng)學(xué)院學(xué)報(bào);1996年01期

6 徐艷聆;王振營(yíng);何康來;白樹雄;;轉(zhuǎn)Bt基因抗蟲玉米對(duì)亞洲玉米螟幼蟲幾種主要酶系活性的影響[J];昆蟲學(xué)報(bào);2006年04期

7 劉勝貴;魏麟;;應(yīng)用PCR技術(shù)檢測(cè)豬肉中沙門氏菌的研究[J];食品科學(xué);2007年03期

8 楊保偉;申進(jìn)玲;席美麗;張秀麗;崔生輝;王新;孟江洪;;2007—2008年西安地區(qū)雞肉源沙門氏菌相關(guān)特性分析[J];食品科學(xué);2011年19期

9 張雙虎;馮王龍;;沙門氏菌病研究探討[J];中國(guó)畜禽種業(yè);2009年06期

10 孫紅祥,潘杭君;免疫佐劑作用機(jī)理的研究進(jìn)展[J];中國(guó)獸藥雜志;2005年10期

【共引文獻(xiàn)】

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1 彭常安,余芳,楊靖東,王考;雙黃連對(duì)原料乳質(zhì)量影響的研究[J];安徽工程科技學(xué)院學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2005年03期

2 張遠(yuǎn);樊瑞莉;;宏觀經(jīng)濟(jì)環(huán)境對(duì)我國(guó)食物安全的影響[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2006年01期

3 魏東;張乃生;;諾氟沙星多克隆抗體的制備[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2007年04期

4 詹愛軍;王新衛(wèi);王憲文;;抗H9亞型AIV血凝素單克隆抗體的制備及亞型鑒定[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2008年03期

5 魏東;徐彤;趙月平;黃智鴻;李秀娟;;抗阿莫西林多克隆抗體的制備[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2008年09期

6 李梅;胡文娥;李銳;聶呈榮;歐陽(yáng)鳳梅;梁嘉瑞;陳彩鳳;;佛山市郊菜地土壤和蔬菜硝酸鹽污染狀況分析[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2008年18期

7 胡曉苗;余為一;張丹俊;;犬血清IgG的純化、抗體制備及其鑒定[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2008年21期

8 李軍;劉美杰;李勇;竇忠英;;重組蛋白包涵體的研究進(jìn)展[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2008年31期

9 李敏;張清燕;;重慶涪陵區(qū)市售蔬菜硝酸鹽和亞硝酸鹽含量及食用安全性評(píng)價(jià)[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2010年34期

10 李源;趙艷;王白娟;;離子色譜法測(cè)定云南普洱茶中的NO_2~-·NO_3~-和PO_4~(3-)含量[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2012年06期

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1 余廣宇;;食品質(zhì)量安全標(biāo)準(zhǔn)體系研究[A];食品安全的理論與實(shí)踐——安徽食品安全博士科技論壇論文集[C];2005年

2 許道艷;劉仁沿;李偉;梁玉波;;酶聯(lián)免疫吸附法分析失去記憶性貝毒ASP[A];有毒化學(xué)污染物監(jiān)測(cè)與風(fēng)險(xiǎn)管理技術(shù)交流研討會(huì)論文集[C];2008年

3 封錦芳;肖榮;張淑華;余煥玲;吳永寧;;北京市市售罐頭魚中鉛、鎘污染狀況及評(píng)價(jià)[A];第二屆重金屬污染監(jiān)測(cè)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià)及修復(fù)技術(shù)高級(jí)研討會(huì)論文集[C];2008年

4 樊麗琴;楊賢慶;陳勝軍;李來好;吳燕燕;;腌制水產(chǎn)品中N-亞硝基化合物的研究進(jìn)展[A];“科技創(chuàng)新與食品產(chǎn)業(yè)可持續(xù)發(fā)展”學(xué)術(shù)研討會(huì)暨2008年廣東省食品學(xué)會(huì)年會(huì)論文集[C];2008年

5 邱妍;董發(fā)明;楊自軍;劉鳳軍;胡元亮;崔保安;;四種多糖對(duì)雞脾臟淋巴細(xì)胞的增殖和一氧化氮分泌的影響[A];河南省畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)第七屆理事會(huì)第二次會(huì)議暨2008年學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2008年

6 孫志新;崔金杰;雒s

本文編號(hào)：2269468