【摘要】：目的:探討Hsp90和RLM1中CAⅠ序列在白念珠菌表型轉(zhuǎn)換過(guò)程的調(diào)控作用。方法:(1)在不同 Dox 濃度(0、40、100、150μg/mL)的 lee's glucose和lee's GlcNAc培養(yǎng)基中,分別于25℃和37℃條件培養(yǎng)觀察GH1013菌株、基因敲除菌株 GH1013-HSP90/hsp90 和條件性敲除菌株 GH1013-tetO-HSP90/hsp90的菌絲生長(zhǎng)情況。(2)利用格德?tīng)柮顾匾种艸sp90表達(dá),觀測(cè)標(biāo)準(zhǔn)菌株SC5314在發(fā)酵糖原及非發(fā)酵糖原中的生長(zhǎng)情況并描繪生長(zhǎng)曲線。(3)在GH1013菌株和條件敲除性菌株GH1013-tetO-HSP90/hsp90中構(gòu)建CDC19、TDH3及PGK1基因與Myc蛋白標(biāo)簽的重組質(zhì)粒,Western blot檢測(cè)其菌株中目的蛋白的表達(dá)情況。(4)將RLMⅠ基因(CA Ⅰ 11、21或30)分別過(guò)表達(dá)于GH1011(MTLa/α)、GH1322(MTLa/α)菌株,觀察過(guò)表達(dá)菌株白菌-灰菌表型轉(zhuǎn)換頻率。結(jié)果:(1)1ee's glucose培養(yǎng)基,25℃和37℃培養(yǎng)條件下,Hsp90低表達(dá)時(shí)菌絲生長(zhǎng)能力強(qiáng)。隨Hsp90的表達(dá)量提高,菌株的菌絲生長(zhǎng)能力減弱。lee'sGlcNAc培養(yǎng)基:①25℃和37℃培養(yǎng)條件下,GH1013菌株和HSP90單敲菌株隨Hsp90表達(dá)量升高,菌絲生長(zhǎng)能力逐漸減弱。②25℃時(shí)HSP90條件性敲除菌株隨Hsp90表達(dá)量升高,菌絲生長(zhǎng)能力減弱;而37℃時(shí)不同的Hsp90表達(dá)量,HSP90條件性敲除菌株形成菌絲的能力無(wú)明顯差異。另外25℃時(shí),HSP90條件性敲除株在GlcNAc培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)速度低于glucose培養(yǎng)基。(2)白念珠菌在甘露醇中生長(zhǎng)情況最好。Hsp90損傷不影響白念珠菌對(duì)葡萄糖、果糖和甘露醇的利用。當(dāng)GlcNAc作為糖原時(shí),Hsp90持續(xù)低表達(dá)會(huì)促進(jìn)白念珠菌的細(xì)胞凋亡。(3)成功構(gòu)建白念珠茵MYC-CDC19、MYC-TDH3和MYC-PGK1重組質(zhì)粒;Western blot證實(shí)Myc-CDC19融合蛋白在GH1013-tetO-HSP90/hsp90菌株中能夠正常表達(dá)。(4)具有不同長(zhǎng)度CAⅠ序列(CAⅠ11、21或30)的RLM1基因過(guò)表達(dá)的GH1011菌株的表型未發(fā)生明顯的改變。隨著CA Ⅰ重復(fù)數(shù)的增加,RLM1基因過(guò)表達(dá)的GH1322菌株的白菌向灰菌轉(zhuǎn)換頻率上升。結(jié)論:白念珠菌的表型轉(zhuǎn)換受到多個(gè)基因的調(diào)控。(1)白念珠菌的Hsp90表達(dá)量越低,促進(jìn)酵母向菌絲轉(zhuǎn)換'作用越強(qiáng)。(2)Hsp90表達(dá)量下降影響白念珠菌對(duì)GlcNAc的利用。(3)Hsp90表達(dá)量降低,GlcNAc促進(jìn)白念珠菌細(xì)胞凋亡。(4)Hsp90與白念珠菌對(duì)發(fā)酵糖和非發(fā)酵糖原的利用無(wú)明顯關(guān)系。(5)R1的CA Ⅰ基因型對(duì)白念珠菌白菌向灰菌形態(tài)轉(zhuǎn)換的調(diào)控能力具有菌株特異性。
[Abstract]:Aim: to investigate the regulatory effect of CA I sequence in Hsp90 and RLM1 on phenotypic transformation of Candida albicans. Methods: (1) the strains of GH1013 were cultured at 25 鈩，

本文編號(hào)：2265103