【摘要】：研究背景和意義癌基因誘導(dǎo)的細(xì)胞衰老(Oncogene-induced senescence,OIS)是當(dāng)今衰老和癌癥研究領(lǐng)域的一個(gè)重要熱點(diǎn)。SAHF(senescence-associated heterochromatic foci)在OIS的發(fā)生和維持中具有核心地位,因此,SAHF形成的機(jī)制是目前OIS研究中最受關(guān)注的問題之一。普通異染色質(zhì),其緊密折疊結(jié)構(gòu)具有解散的潛力,而SAHF緊密折疊結(jié)構(gòu)具有不可逆轉(zhuǎn)性,導(dǎo)致這一現(xiàn)象的機(jī)理尚不明確。基于我們前期的研究和最新的結(jié)果,我們推測在衰老的細(xì)胞中存在BRG1-HP1-H3K9me復(fù)合物,而該復(fù)合物是SAHF形成的核心元件,能使SAHF緊密折疊不可逆轉(zhuǎn)。研究方法與結(jié)果在本研究中,我們通過表達(dá)H-RAS~(G12V)誘導(dǎo)了細(xì)胞衰老,通過免疫熒光染色,我們發(fā)現(xiàn)在RAS過表達(dá)的細(xì)胞中BRG1、HP1和H3K9me共定位,且都存在于SAHF中。免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)結(jié)果也顯示,在RAS激活細(xì)胞中,BRG1、HP1和H3K9me之間的相互作用顯著增強(qiáng)。此外,GST-Pull down的結(jié)果證實(shí)BRG1和HP1以及H3K9me之間存在相互作用。在此基礎(chǔ)上,我們通過過表達(dá)BRG1(295-634AA)或者BRG1(1223-1420AA)競爭性地抑制BRG1-HP1-H3K9me復(fù)合物的形成,進(jìn)而抑制了RAS誘導(dǎo)的SAHF的形成。證明了BRG1-HP1-H3K9me復(fù)合物是SAHF形成的核心結(jié)構(gòu)。結(jié)論本研究證實(shí)了RAS誘導(dǎo)的衰老細(xì)胞中存在BRG1-HP1-H3K9me蛋白復(fù)合物,這些復(fù)合物是SAHF形成的核心元件。這些結(jié)果將有助于推進(jìn)SAHF形成的機(jī)制研究,并幫助研究人員深入了解復(fù)雜的OIS過程。
[Abstract]:Background and significance of oncogene-induced cell senescence (Oncogene-induced senescence,OIS) is an important research hotspot in the field of aging and cancer. SAHF-SAHF (senescence-associated heterochromatic foci) plays a central role in the occurrence and maintenance of OIS). Therefore, the mechanism of formation of OIS is one of the most concerned issues. Common heterochromatin has the potential to dissolve its compact folding structure, while the SAHF compact folding structure has irreversibility, so the mechanism of this phenomenon is not clear. Based on our previous studies and recent results, we speculate that there is a BRG1-HP1-H3K9me complex in aging cells, which is the core component of SAHF formation and makes SAHF tightly folded irreversibly. Methods and results in this study, we induced cell senescence by expression of H-RAS-G12V. By immunofluorescence staining, we found that BRG1,HP1 and H3K9me were co-localized in the overexpression of RAS and both existed in SAHF. The results of co-immunoprecipitation also showed that the interaction between HP1 and H3K9me was significantly enhanced in RAS activated cells. In addition, the results of GST-Pull down confirm the interaction between BRG1, HP1 and H3K9me. On this basis, we competitively inhibit the formation of BRG1-HP1-H3K9me complexes by overexpression of BRG1 (295-634AA) or BRG1 (1223-1420AA), and further inhibit the formation of SAHF induced by RAS. It is proved that BRG1-HP1-H3K9me complex is the core structure of SAHF. Conclusion this study confirmed the existence of BRG1-HP1-H3K9me protein complexes in RAS-induced aging cells, which are the core components of SAHF formation. These results will help advance the mechanism of SAHF formation and help researchers understand complex OIS processes in depth.
【學(xué)位授予單位】：江蘇大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R3416

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本文編號：2246174