【摘要】：目的:原核表達炭疽桿菌保護性抗原PA10蛋白,制備單克隆抗體,并進行功能分析。方法:人工合成炭疽桿菌保護性抗原PA10編碼基因并克隆入pUC57載體,酶切鑒定后,將PA10編碼基因插入原核表達載體pColdⅡ中,測序驗證正確后轉(zhuǎn)化至大腸桿菌BL21(DE3),在IPTG和低溫條件下誘導(dǎo)蛋白表達,SDS-PAGE驗證產(chǎn)物;用HiTrap IMAC HP柱純化重組蛋白,Western blot進一步驗證。以純化獲得PA10重組蛋白為抗原,常規(guī)程序免疫BALB/c小鼠,制備單克隆抗體,并檢測所制備抗體的中和活性。結(jié)果:獲得的PA10重組蛋白免疫小鼠制備單克隆抗體,最終獲得了4株特異性的單克隆抗體(分別命名為2G8、5A8、7B3、9C9)。經(jīng)體外炭疽毒素保護試驗證實,其中1株單抗(7B3)具有較強的中和活性,其保護率可高達96%。結(jié)論:本文成功構(gòu)建并表達炭疽桿菌保護性抗原PA10,制備了具有中和活性的抗PA單克隆抗體,為構(gòu)建人源化的抗PA中和抗體奠定基礎(chǔ),從而有望用于炭疽病的治療。
[Abstract]:Aim: to express PA10 protein of Bacillus anthracis protective antigen in prokaryotic expression and to prepare monoclonal antibody and analyze its function. Methods: the PA10 encoding gene of Bacillus anthracis protective antigen was synthesized and cloned into pUC57 vector. The PA10 encoding gene was inserted into the prokaryotic expression vector pCold 鈪，

本文編號：2210488