【摘要】：目的原核表達(dá)肺炎鏈球菌表面的毒性蛋白(pneumococcal surface protein A,PspA)并加入到人類(lèi)單核細(xì)胞的培養(yǎng)基中,檢測(cè)該蛋白對(duì)人類(lèi)單核細(xì)胞釋放炎性細(xì)胞因子和趨化因子的影響。方法將重組質(zhì)粒pET-32a(+)/PspA轉(zhuǎn)化到大腸桿菌BL21(DE3)中,經(jīng)IPTG誘導(dǎo)重組菌表達(dá)TRx-His-PspA融合蛋白并純化;通過(guò)腸激酶切掉融合蛋白的TRx-His部分,獲得PspA蛋白。再將PspA蛋白加入到人類(lèi)單核細(xì)胞的培養(yǎng)基中共孵育,ELISA檢測(cè)培養(yǎng)基上清中IL-6、TNF-α、IL-1β、CXCL8、CCL2、CCL3、CCL4、CCL5濃度的差異;最后,將放線菌素D或者放線菌酮也加入到細(xì)胞培養(yǎng)基中,ELISA方法檢測(cè)其對(duì)PspA蛋白促單核細(xì)胞合成炎性細(xì)胞因子的干預(yù)作用。結(jié)果重組菌表達(dá)TRx-His-PspA融合蛋白相對(duì)分子質(zhì)量約為70 000,純化后用腸激酶切除融合蛋白的TRx-His部分,獲得PspA蛋白(相對(duì)分子量為50 000);ELISA試驗(yàn)表明PspA蛋白刺激人類(lèi)單核細(xì)胞后,單核細(xì)胞系合成和釋放到培養(yǎng)基上清的IL-6、CXCL8、CCL2、CCL4和CCL5顯著增加(P0.05);而加入了放線菌素D或者放線菌酮后,PspA蛋白刺激人類(lèi)單核細(xì)胞釋放IL-6、CXCL8、CCL2、CCL4和CCL5的能力明顯減弱。結(jié)論重組的PspA蛋白可以誘導(dǎo)人類(lèi)單核細(xì)胞重新合成和分泌炎性細(xì)胞因子IL-6和趨化因子CXCL8、CCL2、CCL4、CCL5,揭示了天然免疫的效應(yīng)細(xì)胞—單核細(xì)胞和肺炎鏈球菌致病因素之間的關(guān)系,將有助于制定新的戰(zhàn)略來(lái)控制肺炎鏈球菌侵入性疾病。
[Abstract]:Objective to investigate the effect of prokaryotic expression of (pneumococcal surface protein A PspA on the release of inflammatory cytokines and chemokines from human monocytes. Methods the recombinant plasmid pET-32a () / PspA was transformed into Escherichia coli BL21 (DE3). The recombinant strain was induced by IPTG to express and purify TRx-His-PspA fusion protein, and the PspA protein was obtained by removing the TRx-His part of the fusion protein by enterokinase. Then the PspA protein was added to the culture medium of human monocytes to detect the difference of the concentration of IL-6,TNF- 偽 -nil IL-1 尾 in the supernatant of the medium by co-incubating with CCL2CCL3, CCL4 and CCL5 in the supernatant of the medium. Actinomycin D or actinomycin was added to the cell culture medium to detect its effect on the synthesis of inflammatory cytokines induced by PspA protein. Results the relative molecular weight of the TRx-His-PspA fusion protein expressed by the recombinant strain was about 70,000. After purification, the TRx-His part of the fusion protein was removed by enterokinase, and the PspA protein (relative molecular weight was 50 000) was obtained by Elisa. The results showed that the PspA protein stimulated human monocytes. The synthesis and release of IL-6,CXCL8,CCL2,CCL4 and CCL5 into the supernatant of monocytes increased significantly (P0.05), but the ability of PspA protein to stimulate the release of IL-6,CXCL8,CCL2,CCL4 and CCL5 by human monocytes was significantly decreased after the addition of actinomycin D or actinomycin. Conclusion Recombinant PspA protein can induce the resynthesis and secretion of inflammatory cytokine IL-6 and chemokine CXCL8,CCL2,CCL4,CCL5, in human monocytes, which reveals the relationship between the effector cells-monocytes and Streptococcus pneumoniae. It will help to develop new strategies to control Streptococcus pneumoniae invasiveness.
【作者單位】： 重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院檢驗(yàn)科;重慶醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病原生物學(xué)教研室;
【分類(lèi)號(hào)】：R378.14

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本文編號(hào)：2201546