【摘要】：目的檢測(cè)肝細(xì)胞靶向性半乳糖基化聚乙烯亞胺衍生物Gal-Bu對(duì)大鼠肝細(xì)胞(BRL-3A)的轉(zhuǎn)染效率。方法對(duì)PEI-Bu化學(xué)修飾以半乳糖基團(tuán)制備Gal-Bu,瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)其復(fù)合質(zhì)粒DNA的能力;MTT法檢測(cè)Gal-Bu對(duì)BRL-3A的細(xì)胞毒性;以熒光素酶質(zhì)粒作為報(bào)告基因,測(cè)定Gal-Bu在BRL-3A細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率;半乳糖競(jìng)爭抑制實(shí)驗(yàn)觀察Gal-Bu對(duì)肝細(xì)胞的靶向性。結(jié)果瓊脂糖凝膠電泳表明在質(zhì)量比15時(shí),Gal-Bu具有復(fù)合DNA的能力。在5～100μg/mL濃度范圍內(nèi),Gal-Bu和PEI 25 000的細(xì)胞毒性隨濃度升高而增大;在同一濃度下,Gal-Bu的細(xì)胞毒性小于PEI 25 000(P0.01)。Gal-Bu/DNA在質(zhì)量比為50時(shí)達(dá)到最高轉(zhuǎn)染活性,其數(shù)值為PEI 25 000的5.6倍(P0.01),且接近Lipofectamine 2000。半乳糖競(jìng)爭抑制實(shí)驗(yàn)表明,100 mmol/L的半乳糖可顯著降低Gal-Bu的轉(zhuǎn)染效率(P0.01),但是并不影響PEI-Bu的轉(zhuǎn)染效率(P0.05)。結(jié)論 Gal-Bu是一種低細(xì)胞毒性、高轉(zhuǎn)染活性的非病毒肝細(xì)胞靶向基因載體,在肝臟疾病的基因治療領(lǐng)域中具有潛在的應(yīng)用前景。
[Abstract]:Aim to investigate the transfection efficiency of hepatocyte targeted galactosylated polyimide derivative (Gal-Bu) on rat hepatocytes (BRL-3A). Methods PEI-Bu was chemically modified with galactose group to prepare Gal-Bu.The ability of agarose gel electrophoresis to detect the cytotoxicity of Gal-Bu to BRL-3A was detected by agarose gel electrophoresis, and the transfection efficiency of Gal-Bu in BRL-3A cells was determined by using luciferase plasmid as reporter gene. The aim of Gal-Bu on hepatocytes was observed by galactose competitive inhibition experiment. Results agarose gel electrophoresis showed that Gal-Bu had the ability to compound DNA at 15:00. The cytotoxicity of Gal-Bu and PEI 25 000 increased with the concentration of 5 渭 g/mL, and the cytotoxicity of Gal-Bu at the same concentration was lower than that of PEI 25 000 (P0.01). Gal-Bu-DNA reached the highest transfection activity when the mass ratio was 50, its value was 5.6 times of that of PEI 25 000 (P0.01) and close to that of Lipofectamine 2000. Galactose competitive inhibition test showed that galactose could significantly reduce the transfection efficiency of Gal-Bu (P0.01), but did not affect the transfection efficiency of PEI-Bu (P0.05). Conclusion Gal-Bu is a non-viral hepatocyte targeting gene vector with low cytotoxicity and high transfection activity. It has potential application in gene therapy of liver diseases.
【作者單位】： 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬新華醫(yī)院老年科;上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第九人民醫(yī)院老年科;上海交通大學(xué)藥學(xué)院;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(81001416,30973152,81270205) 上海市科委基金(10JC1408902)~~
【分類號(hào)】：R341;Q789

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 季守平;杜福勝;王穎麗;章?lián)P培;;一種可降解的陽離子聚合物基因轉(zhuǎn)染試劑[J];生物技術(shù)通訊;2007年05期

2 劉決照;辛梅華;李明春;;殼聚糖基非病毒基因載體研究新進(jìn)展[J];化工進(jìn)展;2010年08期

3 張宏達(dá);胡寶成;;納米顆粒作為基因載體的應(yīng)用[J];生物技術(shù)通訊;2007年02期

4 周林珠;甘璐;楊祥良;;PLA-PAMAM納米粒作為非病毒基因載體的研究[J];華中科技大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2007年06期

5 馬百超;張樹彪;王冰;崔韶暉;段艷;楊穎;;細(xì)胞種類對(duì)陽離子脂質(zhì)體介導(dǎo)基因轉(zhuǎn)染的影響[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2008年14期

6 張曉;郭執(zhí)章;黃嵐;李建樹;;作為非病毒基因載體的環(huán)糊精及其衍生物[J];中國生物工程雜志;2008年10期

7 程述森,石應(yīng)康,梁衛(wèi)東,李煒如,熊英;生物心瓣材料細(xì)胞毒性試驗(yàn)方法敏感性比較[J];華西醫(yī)學(xué);1999年02期

8 于萬龍;;人體對(duì)流感活和滅活疫苗的抗體及細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞應(yīng)答[J];國際生物制品學(xué)雜志;1983年04期

9 李培;邱飛;吳龍火;許瑞安;;多功能信封式納米載體研究進(jìn)展[J];中國生物工程雜志;2010年06期

10 范美音;董安康;吳瓊;陶鳳云;趙偉;;中國林蛙細(xì)胞毒性核糖核酸酶的原核表達(dá)[J];生物技術(shù);2011年01期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 宋勇波;周金平;孫云霞;張先正;張俐娜;;分子量和取代度對(duì)纖維素季銨鹽基因轉(zhuǎn)染效率的影響[A];2009年全國高分子學(xué)術(shù)論文報(bào)告會(huì)論文摘要集（下冊(cè)）[C];2009年

2 劉鈺;楊釗;郝建原;;非病毒基因載體mPEG-PCL-PEI的研究[A];2011年全國高分子學(xué)術(shù)論文報(bào)告會(huì)論文摘要集[C];2011年

3 張徐;朱偉;王梅;曹慧玲;徐學(xué)靜;錢暉;許文榮;;慢病毒轉(zhuǎn)染大鼠骨髓間質(zhì)干細(xì)胞條件優(yōu)化及其性質(zhì)研究[A];華東六省一市生物化學(xué)與分子生物學(xué)會(huì)2008年學(xué)術(shù)交流會(huì)論文摘要匯編[C];2008年

4 鄭明星;王燕銘;;新型非病毒基因傳遞系統(tǒng)——PH敏感型含糖聚合物[A];2009年全國高分子學(xué)術(shù)論文報(bào)告會(huì)論文摘要集（下冊(cè)）[C];2009年

5 李艷;陳冠軍;劉巍峰;;酵母菌半乳糖代謝基因的調(diào)控研究[A];2008年中國微生物學(xué)會(huì)學(xué)術(shù)年會(huì)論文摘要集[C];2008年

6 徐冬梅;余家會(huì);劉永彪;孫漢文;姚思德;;光化學(xué)法合成高基因轉(zhuǎn)染效率的聚乙烯亞胺[A];第6屆輻射研究與輻射工藝學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2004年

7 解慧琪;楊志明;鄧力;李秀群;宋超;羅靜聰;;不同方法轉(zhuǎn)染綠色熒光蛋白真核表達(dá)載體pEGFP-N1轉(zhuǎn)染效率的比較研究[A];2005'中國修復(fù)重建外科論壇論文匯編[C];2005年

8 侯穎;張大銘;;報(bào)告基因在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中表達(dá)的研究[A];中國動(dòng)物學(xué)會(huì)獸類學(xué)分會(huì)第六屆會(huì)員代表大會(huì)暨學(xué)術(shù)討論會(huì)論文摘要集[C];2004年

9 孔茵;李達(dá);黃宏靚;閔莉靜;宋曉曉;周峻;湯谷平;;靶向自組裝功能型非病毒性轉(zhuǎn)基因載體星狀PEG鍵合PEI偶合轉(zhuǎn)鐵蛋白的體外研究[A];第十次中國生物物理學(xué)術(shù)大會(huì)論文摘要集[C];2006年

10 鄭玉姝;趙樸;劉興友;趙坤;姚四新;劉麗艷;王憲文;;介導(dǎo)RNAi的病毒載體研究進(jìn)展[A];第四屆第九次全國學(xué)術(shù)研討會(huì)暨飼料和動(dòng)物源食品安全戰(zhàn)略論壇論文集（下冊(cè)）[C];2008年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前1條

1 中國食品添加劑和配料協(xié)會(huì) 尤新;天然植物提取物發(fā)展動(dòng)向（二）[N];中國食品報(bào);2008年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 姜啟英;配體介導(dǎo)的非病毒基因載體的研究[D];浙江大學(xué);2011年

2 馬青原;EDEM2、ARFRP1及ERp29對(duì)蓖麻毒素逆向轉(zhuǎn)運(yùn)的作用[D];吉林大學(xué);2008年

3 朱丹;小鼠器官發(fā)育中β-1，，3（4）-半乳糖基轉(zhuǎn)移酶的表達(dá)及功能的研究[D];復(fù)旦大學(xué);2003年

4 宋旭;非酶糖基化致衰老理論的實(shí)驗(yàn)研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);1999年

5 汪寶忠;辛納毒蛋白細(xì)胞毒性及熱穩(wěn)定性研究[D];中國科學(xué)院研究生院（上海生命科學(xué)研究院）;2003年

6 陳舌;PKB對(duì)β1，4半乳糖基轉(zhuǎn)移酶Ⅰ調(diào)控及p110C與PAK1相互作用的研究[D];復(fù)旦大學(xué);2003年

7 魏海燕;酵母朊蛋白Sup35NM體外淀粉樣纖維形成與解聚的動(dòng)力學(xué)及其細(xì)胞毒性研究[D];山東大學(xué);2006年

8 韓磊;復(fù)合功能基因投遞系統(tǒng)的構(gòu)建和體內(nèi)外研究[D];天津大學(xué);2008年

9 張玉石;采用自體肌衛(wèi)星細(xì)胞及異種膀胱無細(xì)胞基質(zhì)構(gòu)建組織工程膀胱的實(shí)驗(yàn)研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2006年

10 張燕搏;體外構(gòu)建小口徑組織工程化血管的初步實(shí)驗(yàn)研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2006年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 肖波;肝靶向性殼聚糖轉(zhuǎn)基因載體的設(shè)計(jì)、合成及其生物安全性初步評(píng)價(jià)[D];華中科技大學(xué);2008年

2 趙玉瑜;含羥基的陽離子聚合物的合成及其基因傳遞性能的研究[D];南京理工大學(xué);2013年

3 李健;豬產(chǎn)毒素多殺性巴氏桿菌toxA基因的功能結(jié)構(gòu)域研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2007年

4 何慶;糖基化與非糖基化Onconase在巴斯德畢赤酵母中的分泌表達(dá)、純化與活性鑒定[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2009年

5 何楊艷;白車軸草水浸提液對(duì)蠶豆根尖細(xì)胞的細(xì)胞毒性[D];四川師范大學(xué);2009年

6 李琳子;半乳糖修飾胰蛋白酶的研究[D];暨南大學(xué);2010年

7 楊慧;陽離子聚合物的合成及胍基化修飾對(duì)基因轉(zhuǎn)染性能的影響[D];南京理工大學(xué);2010年

8 黃建松;美洲商陸抗病毒蛋白-Ⅱ基因的克隆和表達(dá)[D];浙江大學(xué);2006年

9 郭毅;改性殼聚糖超微基因載體系統(tǒng)的構(gòu)建及評(píng)價(jià)[D];天津大學(xué);2006年

10 何芳麗;氨基酸類陽離子脂質(zhì)體在基因轉(zhuǎn)染中的應(yīng)用研究[D];湖南師范大學(xué);2011年

本文編號(hào)：2181336