【摘要】：目的利用小鼠胚胎干細(xì)胞進(jìn)行體外造血細(xì)胞分化,研究LMO2蛋白在成血管細(xì)胞分化過(guò)程中的作用。方法構(gòu)建小鼠成血管細(xì)胞特異性表達(dá)lmo2或綠色熒光蛋白的表達(dá)載體,分別轉(zhuǎn)染小鼠胚胎干細(xì)胞。經(jīng)過(guò)篩選獲得細(xì)胞克隆進(jìn)行自發(fā)分化以形成胚胎體。收集分化0～12 d的胚胎體細(xì)胞,檢測(cè)造血細(xì)胞相關(guān)基因的表達(dá);利用EB細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞集落形成實(shí)驗(yàn)及血細(xì)胞集落形成單位實(shí)驗(yàn),并統(tǒng)計(jì)集落形成數(shù)。結(jié)果成功構(gòu)建了成血管細(xì)胞特異性表達(dá)目的基因的表達(dá)載體,轉(zhuǎn)染目的基因的小鼠胚胎干細(xì)胞在其分化中產(chǎn)生的成血管細(xì)胞可特異表達(dá)目的基因。過(guò)量表達(dá)lmo2能夠促進(jìn)造血相關(guān)基因的表達(dá),所產(chǎn)生細(xì)胞集落數(shù)是對(duì)照組的2倍,晚期造血分化的血細(xì)胞集落形成單位總數(shù)是對(duì)照組的2.5倍,其中紅系集落單位數(shù)是對(duì)照組的3倍。結(jié)論在成血管細(xì)胞中過(guò)量表達(dá)LMO2,促進(jìn)其細(xì)胞增殖及其造血細(xì)胞分化。
[Abstract]:Objective to study the role of LMO2 protein in the process of angioblast differentiation by using mouse embryonic stem cells to differentiate hematopoietic cells in vitro. Methods the expression vector of lmo2 or green fluorescent protein was constructed and transfected into mouse embryonic stem cells. After screening, cell clones were obtained for spontaneous differentiation to form embryoids. Embryonic somatic cells were collected for 12 days of differentiation to detect the expression of hematopoietic cell related genes, and EB cells were used to carry out colony formation test and blood cell colony forming unit test, and to count the colony formation number. Results the expression vector of the target gene was successfully constructed, and the target gene could be specifically expressed by the angioblast produced by the mouse embryonic stem cells transfected with the target gene. Overexpression of lmo2 could promote the expression of hematopoietic related genes, and the number of colony forming units in late hematopoietic differentiation was 2. 5 times as much as that in the control group, and the number of colony forming units in late hematopoietic differentiation was 2. 5 times as much as that in the control group. The number of colony units of red line was 3 times as much as that of control group. Conclusion LMO2 is overexpressed in angioblasts to promote cell proliferation and hematopoietic differentiation.
【作者單位】： 安徽醫(yī)科大學(xué)生物化學(xué)與分子生物學(xué)教研室;安徽醫(yī)科大學(xué)附屬省立醫(yī)院兒科;中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(81172591) 中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室開(kāi)放課題(2060204) 安徽醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)術(shù)、科研活動(dòng)資助項(xiàng)目(XJ200801)~~
【分類(lèi)號(hào)】：R329

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【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2177721