【摘要】：目的建立一種改良的惡性瘧原蟲核蛋白和胞漿蛋白分離方法,并對分離的蛋白組分進行分析和鑒定。方法分別用含不同鹽濃度的裂解緩沖液和不同研磨次數(shù)提取核蛋白和胞漿蛋白,并利用針對不同組分特異性蛋白的抗體進行Western blot,分析分離效果。結(jié)果含50mmol/L NaCl的裂解緩沖液和研磨100~150次為分離核蛋白和胞漿蛋白最佳條件,惡性瘧原蟲醛縮酶胞漿蛋白和組蛋白3核蛋白的抗體Western blot、抗GFP抗體Western blot及活細(xì)胞免疫熒光檢測均表明該方法效果良好。結(jié)論建立了一種快速、有效的惡性瘧原蟲核蛋白和胞漿蛋白的分離方法(裂解液鹽濃度為50mmol/L,研磨100~150次),為研究惡性瘧原蟲蛋白的胞內(nèi)分布以及蛋白質(zhì)/蛋白質(zhì)/核酸相互作用提供了重要的技術(shù)手段。
[Abstract]:Objective to establish an improved method for the isolation of nucleoprotein and cytosolic protein from Plasmodium falciparum, and to analyze and identify the components of the proteins isolated from Plasmodium falciparum. Methods the nucleoprotein and cytosolic protein were extracted with different salt concentration and different grinding times respectively. Western blots were used to analyze the separation effect of the antibodies against different component specific proteins. Results the optimal conditions for the separation of nuclear and cytoplasmic proteins were the cleavage buffer containing 50mmol/L NaCl and 100m lapping. The antibodies of plasmodium falciparum aldolase cytosolic protein and histone 3 nucleoprotein were detected by Western blot, anti GFP antibody Western blot and living cell immunofluorescence. Conclusion A fast method is established. The effective isolation method of plasmodium falciparum nucleoprotein and cytosolic protein (50 mmol / L lysate salt concentration, 150 grinding times) provides an important technical means for studying the intracellular distribution of Plasmodium falciparum protein and the interaction between protein and nucleic acid.
【作者單位】： 同濟大學(xué)傳染病與疫苗研究所;
【基金】：國家自然科學(xué)基金項目(No.31271388) 中央高校基本科研業(yè)務(wù)費專項資金
【分類號】：R382.31

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號：2149546