【摘要】：目的構(gòu)建尿路致病性大腸桿菌(UPEC)W140菌株的黏附素基因iha缺陷株,分析iha基因缺失對UPEC生物膜形成的影響。方法采用Red重組系統(tǒng)的3種質(zhì)粒(pKD46、pKD3、pCP20)敲除W140菌株的iha基因。pKD46表達(dá)λ噬菌體的3個重組蛋白,轉(zhuǎn)入W140菌株使其具有同源重組能力。以pKD3攜帶的兩側(cè)帶有翻轉(zhuǎn)酶結(jié)合位點(FRT)的氯霉素抗性基因替換目的基因iha,再利用表達(dá)翻轉(zhuǎn)酶重組酶的質(zhì)粒pCP20將FRT之間的氯霉素抗性基因刪除,從而獲得iha基因敲除菌株。采用結(jié)晶紫染色法比較野生菌株與基因敲除菌株的細(xì)菌生物膜形成差異。結(jié)果 PCR驗證和DNA測序表明,UPEC W140菌株染色體上的iha基因被成功敲除,得到iha基因缺陷株UPEC W140Δiha�；蛉毕菥昱c野生菌株相比生物膜形成能力降低(P0.01)。結(jié)論 iha基因及其編碼產(chǎn)物參與UPEC生物膜的形成,通過抑制該基因的表達(dá)有望為控制尿路感染提供新的靶點。
[Abstract]:Objective to construct the iha deficient strain of urinary tract pathogenic Escherichia coli (UPECW140) and analyze the effect of iha gene deletion on biofilm formation. Methods three kinds of plasmids (pKD46, pKD3, pCP20) of Red recombination system were used to knockout the iha gene of W140 strain. PKD46 expressed three recombinant proteins of 位 phage. The chloramphenicol resistance gene with reverse enzyme binding site (FRT) on both sides of pKD3 was used to replace the target gene iha. then the recombinant plasmid pCP20 expressing reverse enzyme was used to delete the chloramphenicol resistance gene between FRTs and obtain the knockout strain of iha gene. The difference of bacterial biofilm formation between wild strain and gene knockout strain was compared by crystal violet staining. Results PCR and DNA sequencing showed that the iha gene on the chromosomes of UPEC W140 was successfully knocked out and the iha gene deficient strain UPEC W140 螖 IIA was obtained. The ability of biofilm formation of gene deficient strain was lower than that of wild strain (P0.01). Conclusion iha gene and its encoding products are involved in the formation of biofilm, which may provide a new target for the control of urinary tract infection by inhibiting the expression of this gene.
【作者單位】： 武警后勤學(xué)院病原生物與免疫學(xué)教研室;
【基金】：武警后勤學(xué)院科研基金面上項目(WHM201202)~~
【分類號】：R378

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