本文選題：弓形蟲 + 肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白��； 參考：《山東大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：目的:剛地弓形蟲疾病在全世界范圍內(nèi)普遍流行,對人類的身體狀況造成了嚴(yán)重的傷害。因此,研制弓形蟲疫苗治療弓形蟲疾病迫在眉睫。本實(shí)驗(yàn)研究目的主要是評(píng)估弓形蟲肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白(Toxofilin)基因疫苗對小鼠的免疫效果。此外,我們分別將單佐劑(鋁鹽佐劑(alum),脂質(zhì)體A(MPLA)),雙佐劑(alum+MPLA)分別與Toxofilin DNA疫苗聯(lián)合使用注入到宿主體內(nèi)從而進(jìn)行篩選宿主抗體表達(dá)能力。方法:使用生物信息學(xué)的方法,我們分析了 Toxofilin表達(dá)蛋白的氨基酸排列序列,并且運(yùn)用相關(guān)生物學(xué)軟件預(yù)測了 Toxofilin蛋白幾個(gè)潛在的B細(xì)胞,T細(xì)胞抗原表位。將BALB/c小鼠分為四個(gè)實(shí)驗(yàn)組(單Toxofilin DNA疫苗,alum佐劑+DNA疫苗,MPLA佐劑+DNA疫苗,雙佐劑(alum+MPLA)+ DNA疫苗),并且將上述四組實(shí)驗(yàn)試劑連續(xù)免疫小鼠三次,通過檢測弓形蟲總抗體以及細(xì)胞因子的含量來評(píng)價(jià)小鼠產(chǎn)生的免疫反應(yīng)。待第三次免疫小鼠14天后,將致死性劑量的弓形蟲(RH株)速殖子腹腔注射到小鼠體內(nèi),通過觀察小鼠的存活時(shí)間進(jìn)而來驗(yàn)證DNA疫苗并且結(jié)合不同佐劑對小鼠的免疫保護(hù)性。結(jié)果:所有實(shí)驗(yàn)組(Toxofilin,Toxofilin+alum,Toxofilin+MPLA,Toxofilin+alum+MPLA)免疫小鼠后,在其小鼠體內(nèi),細(xì)胞免疫與體液免疫水平都明顯高于對照組(PBS,alum,MPLA)。此外,與單基因組(Toxofilin)疫苗相比,alum+Toxofilin基因疫苗聯(lián)合使用增強(qiáng)了體液免疫應(yīng)答與Th2型細(xì)胞免疫應(yīng)答,相反地MPLA+Toxofilin 一起使用增強(qiáng)了體液免疫應(yīng)答與Thl型細(xì)胞免疫反應(yīng)。更重要地是,與alum+Toxofilin相比,將MPLA與alum+Toxofilin基因疫苗聯(lián)合使用能夠轉(zhuǎn)變alum+Toxofilin基因疫苗中細(xì)胞免疫應(yīng)答的類型,將Th2型細(xì)胞免疫轉(zhuǎn)變?yōu)門hl型細(xì)胞免疫,同時(shí),在alum+MPLA+Toxofilin基因疫苗免疫組中,體液免疫與Thl型細(xì)胞免疫應(yīng)答都顯著高于其它實(shí)驗(yàn)組與對照組,最后通過弓形蟲速殖子攻擊實(shí)驗(yàn)來評(píng)價(jià)基因疫苗與不同佐劑對小鼠的免疫保護(hù)性,結(jié)果表明,與其它實(shí)驗(yàn)組與對照組相比,alum+MPLA+Toxofilin基因疫苗明顯地延長了小鼠的存活時(shí)間。結(jié)論:剛地弓形蟲Toxofilin基因可以作為一個(gè)合適的候選疫苗,將復(fù)合佐劑alum+MPLA與Toxofilin基因共同使用,使小鼠體內(nèi)的免疫應(yīng)答包括細(xì)胞免疫與體液免疫應(yīng)答都明顯地增強(qiáng)與提高。
[Abstract]:Objective: Toxoplasma gondii disease is prevalent all over the world, causing serious damage to human health. Therefore, it is urgent to develop Toxoplasma vaccine to treat Toxoplasma gondii. The aim of this study was to evaluate the immunological effect of Toxofilin gene vaccine on mice. In addition, single adjuvant (aluminum salt adjuvant (alum), liposome A (MPLA), double adjuvant) (alum MPLA) and Toxofilin DNA vaccine were injected into the host to screen the host antibody expression ability. Methods: the amino acid sequence of Toxofilin protein was analyzed by bioinformatics, and several potential T cell epitopes of Toxofilin protein were predicted by relevant biological software. Balb / c mice were divided into four experimental groups (single Toxofilin DNA adjuvant DNA vaccine and double adjuvant (alum MPLA) DNA vaccine). The immune response of mice was evaluated by detecting total antibodies and cytokines of Toxoplasma gondii (Toxoplasma gondii). After the third immunization of mice for 14 days, the lethal dose of Toxoplasma gondii (RH strain) tachyzoites were injected intraperitoneally into mice. The survival time of mice was observed to verify the DNA vaccine and the immune protection of mice combined with different adjuvants. Results: the levels of cellular immunity and humoral immunity in all the experimental groups were significantly higher than those in the control group (PBSalumin MPLA) after the mice were immunized with Toxofilin Toxofilin alum MPLA. In addition, the combination of Toxofilin gene vaccine and Toxofilin gene vaccine enhanced humoral immune response and Th2 type cellular immune response, whereas MPLA Toxofilin combined with MPLA Toxofilin enhanced humoral immune response and Thl type cellular immune response. More importantly, compared with alum Toxofilin, the combination of MPLA and alum Toxofilin gene vaccine can change the type of cellular immune response in alum Toxofilin gene vaccine, transform Th2 type cellular immunity into Thl type cellular immunity, at the same time, In the alum MPLA Toxofilin gene vaccine immunized group, humoral immunity and Thl type cellular immune response were significantly higher than those of other experimental and control groups. Finally, the immune protection of Toxoplasma gondii Tachyzoites was evaluated by Toxoplasma gondii Tachyzoites attack test. The results showed that compared with other experimental groups and control groups, the survival time of mice was significantly prolonged by MPLA Toxofilin gene vaccine. Conclusion: Toxofilin gene of Toxoplasma gondii can be used as a suitable candidate vaccine. The combined adjuvant alum MPLA and Toxofilin gene can significantly enhance and enhance the immune response, including cellular and humoral immune responses in mice.
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R392

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本文編號(hào)：2103899