本文選題：DNA甲基化 + 胚胎干細(xì)胞�。� 參考：《中國病理生理雜志》2013年05期

【摘要】：目的:用全基因組甲基化芯片探討可能參與小鼠胚胎干細(xì)胞(ESCs)分化為表皮樣細(xì)胞(ELCs)的基因DNA甲基化調(diào)控機(jī)制。方法:利用人羊膜建立體外誘導(dǎo)體系,將小鼠ESCs誘導(dǎo)定向分化為ELCs,分別取未分化的ESCs和誘導(dǎo)分化后的ELCs進(jìn)行芯片分析,利用甲基化免疫共沉淀技術(shù)將每組染色質(zhì)DNA的甲基化片段共沉淀下來,和本底對(duì)照(input)分別標(biāo)記Cy3和Cy5熒光,一同上樣于Roche NimbleGen高密度(2.1M,芯片覆蓋22 425個(gè)啟動(dòng)子)甲基化芯片,啟動(dòng)子區(qū)采用UCSC數(shù)據(jù)庫進(jìn)行注釋,啟動(dòng)子覆蓋轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)上游8 200 bp、下游3 000 bp,通過對(duì)這些啟動(dòng)子區(qū)甲基化譜的分析,篩選出甲基化調(diào)控可能與ESCs向ELCs定向分化相關(guān)的基因。結(jié)果:小鼠ESCs和ELCs兩組細(xì)胞在基因組水平上有17 500個(gè)啟動(dòng)子存在甲基化,其中有3 435個(gè)啟動(dòng)子發(fā)生甲基化差異變化,高CpG島的啟動(dòng)子有894個(gè)發(fā)生差異甲基化,中度CpG島的啟動(dòng)子有974個(gè)發(fā)生差異甲基化,低CpG島的啟動(dòng)子有1 567個(gè)發(fā)生差異甲基化。結(jié)論:在ESCs向ELCs定向分化的過程中,眾多的基因啟動(dòng)子區(qū)發(fā)生了甲基化程度的變化,說明細(xì)胞分化是一個(gè)復(fù)雜的表觀遺傳學(xué)事件。這些基因啟動(dòng)子的差異甲基化在ESCs向ELCs定向分化過程中所起的作用及其機(jī)制尚有待進(jìn)一步的功能學(xué)研究闡明。
[Abstract]:Aim: to explore the regulatory mechanism of gene DNA methylation in the differentiation of mouse embryonic stem cells (ESCs) into epidermoid cells (ELCs) by genomic methylation microarray. Methods: human amniotic membrane was used to establish an in vitro induction system. The ESCs were induced to be differentiated into ELCs.The undifferentiated ESCs and the differentiated ELCs were analyzed by microarray analysis. The methylation fragments of each group of chromatin DNA were co-precipitated by methylation immunoprecipitation technique. Cy3 and Cy5 fluorescence were labeled with background (input), respectively. The methylated microarray was prepared on Roche NimbleGen high density (2.1 Md, covering 22 425 promoters). The promoter region was annotated by UCSC database. The promoter covered 8 200 BP upstream of transcription initiation site and 3 000 BP downstream. By analyzing the methylation spectrum of these promoter regions, the genes related to the methylation regulation of ESCs were screened out. Results: there were 17 500 promoters methylated in mouse ESCs and ELCs groups at genomic level, among which 3 435 promoters showed differential methylation changes, while 894 promoters with high CpG island showed differential methylation. Differential methylation occurred in 974 promoter of moderate CpG island and 1,567 in low CpG island. Conclusion: in the process of ESCs differentiation to ELCs, the methylation degree of many gene promoters changes, which indicates that cell differentiation is a complex epigenetic event. The role and mechanism of differential methylation of these gene promoters in the process of ESCs differentiation to ELCs need to be further elucidated.
【作者單位】： 廣東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院 廣東省人民醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)中心;廣東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院 廣東省人民醫(yī)院醫(yī)學(xué)研究中心;
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No.30700327) 廣東省醫(yī)學(xué)科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No.WSTJJ201112062107021969052-10211) 廣東省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No.9151009101000011)
【分類號(hào)】：R329.28

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2103401