本文選題：心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞 + 原代細(xì)胞培養(yǎng)　； 參考：《中國(guó)病理生理雜志》2013年03期

【摘要】：目的:探討一種高效、穩(wěn)定的從小鼠心肌組織中分離培養(yǎng)心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞的方法并觀察細(xì)胞的生物學(xué)特性。方法:以多聚賴氨酸對(duì)培養(yǎng)皿作預(yù)包被,采用Ⅱ型膠原酶消化、差速貼壁分離法,結(jié)合內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基,分離培養(yǎng)微血管內(nèi)皮細(xì)胞并進(jìn)行擴(kuò)增。利用倒置顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況;臺(tái)盼藍(lán)法、繪制生長(zhǎng)曲線和MTT法分別測(cè)定心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞傳代成活率、不同代生長(zhǎng)及增殖特征;以DiI-ac-LDL和FITC-UEA-1熒光雙標(biāo),結(jié)合CD31、vWF和CD34免疫熒光鑒定細(xì)胞表面特異性抗原;體外血管形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞的功能。結(jié)果:酶消化、差速貼壁法分離培養(yǎng)2 d后,細(xì)胞呈散在的、小簇狀聚集性生長(zhǎng),4～5 d迅速生長(zhǎng)呈單層排列,細(xì)胞為梭形、三角形或多角形,7～8 d后呈鋪路石樣即可傳代;傳代細(xì)胞經(jīng)臺(tái)盼藍(lán)法檢測(cè)成活率均為95%以上;第1、3代細(xì)胞生長(zhǎng)曲線近似"S"形,MTT法顯示第1、3代細(xì)胞在第2～4 d吸光度變化較明顯(P0.05);隨傳代次數(shù)的增加,第5代細(xì)胞生長(zhǎng)曲線近似平緩,吸光度無(wú)明顯變化,細(xì)胞逐漸衰老;DiI-ac-LDL和FITC-UEA-1熒光雙標(biāo)陽(yáng)性率為(89.2±3.5)%,相關(guān)特異性抗原CD31、vWF和CD34免疫熒光鑒定陽(yáng)性率為(56.7±3.7)%、(78.5±2.6)%和(67.8±4.2)%;體外血管形成實(shí)驗(yàn)顯示,6～12 h后出現(xiàn)明顯的管腔結(jié)構(gòu)。結(jié)論:以多聚賴氨酸作預(yù)包被,采用Ⅱ型膠原酶消化、差速貼壁法并結(jié)合內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基,可獲得純度較高的小鼠心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞,為心臟疾病的研究提供種子細(xì)胞。
[Abstract]:Aim: to investigate a high efficient and stable method for isolation and culture of myocardial microvascular endothelial cells (MECs) from mouse myocardial tissues and to observe the biological characteristics of the cells. Methods: the microvascular endothelial cells were precoated with polylysine, digested by type 鈪，

本文編號(hào)：2088480