本文選題：人成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子- + 慢病毒顆粒��； 參考：《細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志》2013年12期

【摘要】：目的包裝人成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子21(hFGF21)慢病毒顆粒、確定包裝細(xì)胞人胚腎293T(HEK293T)細(xì)胞的形態(tài)特征以及對(duì)目的基因的轉(zhuǎn)導(dǎo)能力。方法對(duì)慢病毒重組質(zhì)粒Lv105-hFGF21進(jìn)行測(cè)序鑒定,在HEK293T細(xì)胞中包裝為慢病毒顆粒并濃縮,經(jīng)反轉(zhuǎn)錄PCR(RT-PCR)和電鏡檢測(cè)鑒定后,利用實(shí)時(shí)定量PCR測(cè)定病毒滴度。然后感染Vero細(xì)胞,經(jīng)RT-PCR檢測(cè)hFGF21 mRNA的表達(dá)、免疫熒光檢測(cè)hFGF21蛋白的表達(dá)。結(jié)果 RT-PCR結(jié)果表明重組慢病毒能轉(zhuǎn)錄hFGF21 mRNA,電鏡檢測(cè)結(jié)果可以看到典型的慢病毒顆粒形態(tài)特征,其直徑在40～70 nm;重組病毒原液的滴度是3.68×108VG/mL、濃縮液的滴度是1.25×109VG/mL;重組慢病毒感染Vero細(xì)胞后經(jīng)RT-PCR檢測(cè)到細(xì)胞中有hFGF21mRNA表達(dá),免疫熒光測(cè)到Vero細(xì)胞中有hFGF21蛋白表達(dá)。結(jié)論成功包裝了hFGF21慢病毒顆粒并在靶細(xì)胞中獲得表達(dá)。
[Abstract]:Objective to package human fibroblast growth factor 21 (hFGF21) lentivirus particles and determine the morphological characteristics and transduction ability of human embryonic kidney 293T (HEK293T) cells. Methods the recombinant plasmid Lv105-hFGF21 was sequenced and packaged as lentivirus particles in HEK293T cells. After identification by reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR) and electron microscope, the titer of Lv105-hFGF21 was determined by real-time quantitative PCR. Then Vero cells were infected. The expression of hFGF21 mRNA was detected by RT-PCR and the expression of hFGF21 protein was detected by immunofluorescence. Results RT-PCR results showed that recombinant lentivirus could transcribe hFGF21 mRNAs. The titer of recombinant virus was 3.68 脳 108VG / mLand the titer of concentrated solution was 1.25 脳 109VGr / mL.After the recombinant lentivirus infected Vero cells, the expression of hFGF21 mRNA was detected by RT-PCR, and the expression of hFGF21 protein was detected by immunofluorescence in Vero cells. Conclusion HFGF21 lentivirus granules were successfully packaged and expressed in target cells.
【作者單位】： 中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)生物學(xué)研究所;云南省重大傳染病疫苗研發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：協(xié)和青年科研基金資助課題(2012D14)
【分類(lèi)號(hào)】：R392.11

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2054128