本文選題：狂犬病病毒G蛋白 + 噬菌體抗體庫　； 參考：《南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)》2013年07期

【摘要】：目的:構(gòu)建全人源抗狂犬病病毒scFv噬菌體抗體庫,篩選針對狂犬病病毒G蛋白不同表位的單鏈抗體(scFv)并鑒定其中和活性。方法:分離130例經(jīng)狂犬病疫苗免疫接種志愿者的外周血淋巴細(xì)胞,提取總RNA,逆轉(zhuǎn)錄制備cDNA,構(gòu)建全人源抗狂犬病病毒scFv噬菌體抗體庫。以純化的狂犬病病毒G蛋白包板篩選,對陽性克隆進(jìn)行可溶性表達(dá),并鑒定中和活性。結(jié)果:構(gòu)建全人源抗狂犬病病毒scFv噬菌體抗體庫,庫容為5.0×107,經(jīng)核酸序列分析,證實(shí)插入片段為scFv。經(jīng)過5輪篩選,從富集的次級抗體庫中隨機(jī)挑出140個(gè)克隆,通過phage-ELISA鑒定得到4株核酸序列不同的scFv抗體。經(jīng)His-Trap純化后進(jìn)行中和活性鑒定,獲得1株有中和活性的scFv,其中和效價(jià)為0.13 IU/mg。結(jié)論:構(gòu)建全人源抗狂犬病病毒scFv噬菌體抗體庫,獲得1株具有中和活性的抗狂犬病病毒G蛋白scFv抗體,為進(jìn)一步研發(fā)狂犬病治療性抗體藥物奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:Aim: to construct a full-human scFv phage antibody library against rabies virus and to screen scFv antibody against different epitopes of rabies virus G protein. Methods: peripheral blood lymphocytes of 130 volunteers immunized with rabies vaccine were isolated, total RNAs were extracted, and cDNAs were prepared by reverse transcription. The whole human anti-rabies virus scFv phage antibody library was constructed. The purified rabies virus G protein envelope was screened, the positive clones were expressed in a soluble way, and neutralization activity was identified. Results: the whole human phage antibody library against rabies virus scFv was constructed. The library capacity was 5.0 脳 10 7. The inserted fragment was confirmed as scFv by nucleic acid sequence analysis. After five rounds of screening, 140 clones were randomly selected from the enriched secondary antibody library. Four scFv antibodies with different nucleic acid sequences were identified by phage-ELISA. After being purified by His-Trap, a neutralizing scFvv strain was obtained. The neutralization activity of scFvwas 0.13 IU / mg. Conclusion: the whole human anti-rabies virus scFv phage antibody library was constructed, and a neutralizing antibody against rabies virus G protein scFv was obtained, which laid a foundation for further research and development of rabies therapeutic antibody drugs.
【作者單位】： 南京醫(yī)科大學(xué)衛(wèi)生部抗體技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;南京醫(yī)科大學(xué)病理學(xué)系;杭州市紅十字會醫(yī)院結(jié)核科;江陰力博醫(yī)藥生物技術(shù)有限公司;南京軍區(qū)軍事醫(yī)學(xué)研究所;
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助(81273325) 江蘇省科技支撐計(jì)劃資助(BE2011842)
【分類號】：R392.12

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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本文編號：2038569