本文選題：胚胎干細(xì)胞 + 微囊體　； 參考：《臨床兒科雜志》2013年05期

【摘要】：目的探討分離提取及鑒定胚胎干細(xì)胞(ESC)產(chǎn)生的微囊體(MV)的實(shí)驗(yàn)方法,初步研究其促造血的生物學(xué)作用。方法利用超濾離心的方法從小鼠ESC培養(yǎng)上清液中分離提純MV(ES-MV),以小鼠胚胎成纖維細(xì)胞(MEF)培養(yǎng)上清來源的MV(MEF-MV)為對照;采用透射電鏡形態(tài)學(xué)觀察,RT-PCR檢測特異性基因表達(dá)的方法對ES-MV進(jìn)行鑒定;將ES-MV用于環(huán)磷酰胺所致骨髓抑制小鼠,通過骨髓涂片初步觀察其對造血的恢復(fù)作用。結(jié)果透射電鏡下觀察,ES-MV呈明顯異質(zhì)性的圓形或橢圓形小囊泡,直徑約30 nm-1μm不等,有完整的包膜,內(nèi)為低電子密度物質(zhì)。RT-PCR方法從ES-MV中可檢測到Oct-4、Wnt-3、Hoxb4基因的表達(dá),而MEF-MV內(nèi)不能檢測到這些基因的表達(dá);將ES-MV用于骨髓抑制小鼠后,骨髓涂片顯示成熟紅細(xì)胞和有核細(xì)胞比例明顯升高。結(jié)論 ESC可以產(chǎn)生MV,并且是MV的豐富來源;超濾離心法是一種方便實(shí)用的提取ES-MV的方法;ES-MV對促進(jìn)骨髓造血有一定的作用。
[Abstract]:Objective to explore the method of isolation and identification of microcysts (MV) produced by embryonic stem cells (ESC), and to preliminarily study the biological function of its hematopoiesis. Methods the purification of MV (ES-MV) from the mouse ESC culture supernatant by ultrafiltration centrifugation, and the control of MV (MEF-MV) from the culture supernatant of mouse embryonic fibroblasts (MEF), were taken as the control. ES-MV was identified by RT-PCR detection of specific gene expression by means of transmission electron microscopy; ES-MV was used in the bone marrow suppression mice induced by cyclophosphamide, and the hematopoiesis was preliminarily observed by bone marrow smears. The results were observed under transmission electron microscope, and the ES-MV showed an obvious heterostructure round or elliptical vesicle with a diameter of about 30 nm. -1 mu m is unequal, with a complete envelope and a low electron density substance.RT-PCR method to detect the expression of Oct-4, Wnt-3, Hoxb4 gene from ES-MV, but the expression of these genes can not be detected in MEF-MV; after ES-MV is used in bone marrow suppression mice, the proportion of mature erythrocytes and nucleated cells in bone marrow smear is obviously increased. Conclusion ESC can be produced. Conclusion ESC can be produced. MV is a rich source of MV. Ultrafiltration centrifugation is a convenient and practical way to extract ES-MV, and ES-MV plays a certain role in promoting bone marrow hematopoiesis.
【作者單位】： 貴陽醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院兒科;貴陽市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科;
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No.30960412)
【分類號】：R329

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本文編號：2031171