本文選題：輪狀病毒 + 腸道病毒71型　； 參考：《南陽師范學(xué)院》2017年碩士論文

【摘要】：人輪狀病毒(Human rotavirus, HRV)是引起嬰幼兒腹瀉的最主要病原體之一,幾乎所有5歲以下兒童都被感染過至少一次,是造成發(fā)展中國家嬰幼兒死亡的重要病因。這兩種病毒嚴重威脅著人類健康和公共安全。這兩種疾病目前尚無有效的治療藥物,使用減毒活疫苗和滅活疫苗進行免疫仍是預(yù)防和控制這兩種疾病的主要措施。但是,減毒活疫苗可能會發(fā)生基因重組和毒力返強,滅活疫苗則很少甚至無法誘導(dǎo)產(chǎn)生細胞免疫,而且存在著滅活不徹底的潛在風(fēng)險,使得這兩種疫苗都無法達到理想的效果。因此,開發(fā)針對輪狀病毒與腸道病毒71型的新型基因工程疫苗具有十分重要的意義。病毒樣顆粒(Virus-like particles, VLPs)由病毒結(jié)構(gòu)蛋白自我組裝形成,在形態(tài)結(jié)構(gòu)上與真實病毒粒子高度相似,可以高效的誘導(dǎo)體液免疫和細胞免疫,而且由于不含病毒核酸而具有良好的安全性,因此VLPs近年來已經(jīng)成為一種理想的候選基因工程疫苗。這些發(fā)現(xiàn)為研發(fā)新的嵌合型輪狀病毒與腸道病毒71型病毒樣顆粒疫苗奠定了理論基礎(chǔ)。實驗室前期研究已經(jīng)證實,輪狀病毒的VP2、VP6和VP7同時在Sf9細胞中表達會組裝成三層病毒樣顆粒,并且具有良好的免疫效果。此外,有研究發(fā)現(xiàn),輪狀病毒的VP4可以幫助VLPs有效地進入腸道細胞,EV71的主要抗原VP1展示于VLPs表面可以誘導(dǎo)產(chǎn)生高水平的抗體,并具有良好的免疫保護效果。實驗首先利用PCR技術(shù)擴增獲得輪狀病毒的VP2、VP4、VP6、VP7基因和腸道病毒71型的VP1基因,并利用融合PCR技術(shù)將EV71 VP1基因通過柔性接頭與截短的RVVP2基因相融合,得到融合基因ER1,2。將測序驗證正確的病毒結(jié)構(gòu)基因分別克隆入轉(zhuǎn)移載體pFBDM-IM和pUCDM-XIGP中,得到的重組轉(zhuǎn)移載體通過Tn7和Cre-LoxP重組至桿狀病毒Bacmid中,然后將重組Bacmid轉(zhuǎn)染Sf9細胞獲得重組病毒。重組病毒再次感染Sf9細胞72小時后用熒光顯微鏡進行觀察,發(fā)現(xiàn)Sf9細胞出現(xiàn)明顯的細胞病理變化,如細胞明顯變大,細胞增殖不明顯或者不增值,有細胞脫落的現(xiàn)象,倒置熒光顯微鏡下觀察有較多的熒光,證實了重組桿狀病毒的成功構(gòu)建。提取重組桿狀病毒基因組DNA并用RV和EV71病毒基因的特異性引物進行PCR鑒定,結(jié)果表明外源病毒基因已經(jīng)成功重組至桿狀病毒基因組中。隨后用SDS-PAGE電泳和Western blot檢測外源基因的表達情況,結(jié)果顯示VP2、VP6、 VP7、ER1,2蛋白大小分別為104KDa、46KDa、38KDa、127KDa。蛋白條帶較為單一且蛋白大小與預(yù)期一致,由此可見病毒樣顆粒的相關(guān)基因已正確表達,這為以后疫苗的研究和開發(fā)奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:Human rotavirus ( VP4 ) is one of the main pathogens causing infant diarrhea . Almost all children under the age of 5 have been infected at least once , which is an important cause of infant death in developing countries .
【學(xué)位授予單位】：南陽師范學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R392

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 ;輪狀病毒流行出現(xiàn)新動向—加強監(jiān)測與防治研究[J];現(xiàn)代臨床醫(yī)學(xué)生物工程學(xué)雜志;2001年04期

2 呂雪萍,劉建軍,張留英,袁煥珍;輪狀病毒多系統(tǒng)感染的診斷及治療[J];實用兒科臨床雜志;2003年11期

3 李進琴;李蕾;;輪狀病毒與腹瀉[J];兵團醫(yī)學(xué);2006年02期

4 侯茜;梁寶霞;;嬰幼兒感染輪狀病毒的檢測及意義[J];實用醫(yī)技雜志;2006年23期

5 徐錦;孫家娥;丁韻珍;蘇犁云;楊毅;;2001至2005年上海市1450份住院患兒A組輪狀病毒分子流行病學(xué)研究[J];中國循證兒科雜志;2007年02期

6 傅麗云;呼秉蓮;吳立平;;太原地區(qū)A組輪狀病毒的分子流行病學(xué)研究[J];中國優(yōu)生與遺傳雜志;2008年11期

7 任艷玲;;阜新地區(qū)A群輪狀病毒不同季節(jié)分布現(xiàn)狀調(diào)查[J];中國廠礦醫(yī)學(xué);2009年06期

8 蔡月蓮;;A組輪狀病毒夏季流行及控制措施[J];內(nèi)蒙古中醫(yī)藥;2009年04期

9 史麗萍;;淺析如何預(yù)防治療嬰幼兒所患輪狀病毒[J];醫(yī)學(xué)信息(中旬刊);2010年05期

10 章建偉;平雯;高峰;陳海江;;603例急性腹瀉嬰幼兒糞便檢測A群輪狀病毒的分析[J];中國婦幼保健;2012年10期

相關(guān)會議論文 前10條

1 王斌;唐力;劉滿清;彭勁松;涂君;楊繼紅;曾憲啟;;武漢地區(qū)A組輪狀病毒監(jiān)測情況分析(2002～2003年)[A];生命科學(xué)與微生物專輯[C];2004年

2 欒婧婧;高運東;仲躋峰;趙宏坤;;半巢式RT-PCR快速檢測犢牛輪狀病毒方法的建立[A];第六屆全國會員代表大學(xué)暨第11次學(xué)術(shù)研討會論文集（下）[C];2005年

3 王培鑫;潘存Z;陳黎勤;;腸道腺病毒、輪狀病毒、空腸彎曲菌的檢測[A];2006（第三屆）江浙滬兒科學(xué)術(shù)會議暨浙江省兒科學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2006年

4 胡秀華;;細胞培養(yǎng)與real-time RT-PCR相結(jié)合的方法檢測水體中感染性輪狀病毒[A];2006中國微生物學(xué)會第九次全國會員代表大會暨學(xué)術(shù)年會論文摘要集[C];2006年

5 欒婧婧;高運東;仲躋峰;趙宏坤;;半巢式RT-PCR快速檢測犢牛輪狀病毒方法的建立[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜傳染病學(xué)分會第六屆全國會員代表大會暨第11次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2005年

6 夏樂樂;何彪;楊凡力;徐琳;涂長春;;蝙蝠輪狀病毒分離與鑒定[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜傳染病學(xué)分會第八屆全國會員代表大會暨第十五次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2013年

7 時洪艷;馮力;孫東波;;輪狀病毒引起的仔豬腹瀉[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會畜牧獸醫(yī)生物技術(shù)學(xué)分會暨中國免疫學(xué)會獸醫(yī)免疫分會第六次研討會論文集[C];2005年

8 吳淑霞;李秀峰;席靈娟;;急性腹瀉患兒糞便中A群輪狀病毒的檢測結(jié)果分析[A];第一屆寧夏醫(yī)學(xué)會檢驗學(xué)分會學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2005年

9 胡秀華;何苗;;定量測定輪狀病毒滴度的幾種方法的優(yōu)化及細胞系的選擇[A];中醫(yī)藥生物化學(xué)與分子生物學(xué)通訊[C];2008年

10 王斌;孫紅;朱軍生;;PAGE法與膠體金法檢測兒童腹瀉輪狀病毒研究[A];湖北省微生物學(xué)會第十屆理事會分析微生物專業(yè)委員會第四次學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2006年

相關(guān)重要報紙文章 前10條

1 王文斗;輪狀病毒秋冬愛找嬰幼兒[N];南方日報;2004年

2 馮立中;抗人輪狀病毒牛丙球蛋白研制成功[N];健康報;2008年

3 中國醫(yī)科大學(xué)盛京醫(yī)院小兒消化科教授 孫梅　整理 閻紅;輪狀病毒盯上寶寶[N];健康報;2008年

4 通訊員 楊光禮 記者 武娜;輪狀病毒引發(fā)小兒腹瀉增多[N];連云港日報;2008年

5 文 都;小兒秋季腹瀉原是輪狀病毒作怪[N];中國中醫(yī)藥報;2004年

6 徐磊;第二屆國際輪狀病毒研討會在京召開[N];中國醫(yī)藥報;2005年

7 記者 胡蔓 見習(xí)記者 嚴運濤;武漢市疾控中心發(fā)現(xiàn)人A、B組輪狀病毒混合感染[N];湖北日報;2004年

8 本報記者 郭靜 實習(xí)生 賈亞敏 王詩霖 通訊員 肖金;嚴把“入口關(guān)”防秋季小兒腹瀉[N];廣東科技報;2008年

9 ;輪狀病毒并不可怕[N];山西日報;2003年

10 文文;嚴把嬰幼兒“入口”衛(wèi)生關(guān)[N];廣東科技報;2008年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 謝力;表達輪狀病毒NSP4、VP7基因雙順反子腺病毒載體疫苗的構(gòu)建及免疫效果研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2014年

2 肖楠;輪狀病毒G9型（ZTR18）滅活疫苗的免疫學(xué)初步評價[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2014年

3 劉悅越;輪狀病毒減毒活疫苗免疫原性及影響因素研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2016年

4 Onyango,Lawrence Omondi;輪狀病毒與腫瘤疾病的建模及分析[D];哈爾濱工業(yè)大學(xué);2016年

5 米揋;輪狀病毒不同基因型間交叉反應(yīng)研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2015年

6 曾玫;上海地區(qū)兒童腹瀉輪狀病毒感染的臨床流行病學(xué)研究[D];復(fù)旦大學(xué);2003年

7 李國華;桿狀病毒系統(tǒng)中地方株輪狀病毒蛋白的重組表達及病毒樣顆粒的構(gòu)建[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2001年

8 王振玲;北京地區(qū)仔豬腹瀉相關(guān)病原調(diào)查及大腸桿菌和輪狀病毒特性的研究[D];中國農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

9 張二芹;豬A組輪狀病毒VP6基因轉(zhuǎn)植物的研究[D];吉林農(nóng)業(yè)大學(xué);2006年

10 魏靜;人源輪狀病毒T細胞識別及其小型豬腹瀉模型的建立[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2006年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 李慶聰;生物可降解材料對輪狀病毒的控制釋放研究[D];云南民族大學(xué);2015年

2 何磊;烏魯木齊市某三甲醫(yī)院近一年腹瀉患兒輪狀病毒及腺病毒感染調(diào)查[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2015年

3 馬磊;攜大熊貓輪狀病毒CH-1株VP4-VP7雙基因的減毒沙門氏菌的構(gòu)建與免疫原性研究[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

4 劉杰;OSG弱酸性消毒水消毒效果的評估[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

5 湯俊;飼糧添加鼠李糖乳酸桿菌GG對輪狀病毒攻毒仔豬免疫功能和腸道健康的影響[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

6 張琳琳;輪狀病毒單克隆抗體的制備[D];青島科技大學(xué);2016年

7 曹思;細胞網(wǎng)格蛋白和內(nèi)體酸化對輪狀病毒侵入的影響[D];黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué);2016年

8 朱乾乾;輕型胃腸炎伴嬰幼兒良性驚厥的臨床特點研究[D];吉林大學(xué);2016年

9 姜濤;輪狀病毒間接免疫熒光檢測方法的研究[D];長春工業(yè)大學(xué);2016年

10 彭杰;樹，

本文編號：1988455