本文選題：腺病毒載體 + β-catenin��； 參考：《生物技術(shù)通報》2013年11期

【摘要】：旨在研究β-catenin對MSCs遷移的作用,構(gòu)建β-catenin和突變體ΔN90的重組腺病毒載體,在MSCs中驗證其表達情況。將目的基因定向克隆到pAdTrack-CMV穿梭載體上,并經(jīng)PmeⅠ線性化后在BJ5183細菌中與pAdEasy-1骨架質(zhì)粒同源重組,獲得重組腺病毒載體,在QBI-293A細胞中包裝和擴增。結(jié)果顯示,酶切和測序證實Ad-β-catenin和Ad-ΔN90質(zhì)粒構(gòu)建正確,熒光顯微鏡可觀察到GFP的表達,并選出150 MOI為最適感染MSCs的感染復(fù)數(shù),Western blot檢測到Ad-β-catenin和Ad-ΔN90都能增加β-catenin的蛋白表達量,TOPFlash檢測到Ad-β-catenin和Ad-ΔN90都能增加β-catenin的轉(zhuǎn)錄活性。說明成功構(gòu)建Ad-β-catenin和Ad-ΔN90腺病毒載體,并獲得高滴度病毒子。
[Abstract]:In order to study the effect of beta -catenin on MSCs migration, the recombinant adenovirus vector of beta -catenin and mutant Delta N90 was constructed and its expression was verified in MSCs. The target gene was cloned on the pAdTrack-CMV shuttle vector, and after Pme I linearization, the recombinant adenovirus vector was reorganized in BJ5183 bacteria with the pAdEasy-1 skeleton plasmid, and the recombinant adenovirus vector was obtained. It was packed and amplified in QBI-293A cells. The results showed that the construction of Ad- beta -catenin and Ad- Delta N90 plasmid was correct by enzyme digestion and sequencing. The expression of GFP was observed by fluorescence microscope, and 150 MOI was selected as the most suitable infection complex of MSCs, and Western blot detected that both Ad- beta -catenin and delta delta could increase the protein expression of beta. Both Ad- beta -catenin and Ad- Delta N90 could increase the transcriptional activity of beta -catenin, indicating the successful construction of Ad- beta -catenin and Ad- Delta N90 adenovirus vector and high titer virion.
【作者單位】： 蘇州大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與生物科學(xué)學(xué)院江蘇省干細胞研究重點實驗室;
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項目(30870642,31071220)
【分類號】：R346

【參考文獻】

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【共引文獻】

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【二級參考文獻】

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本文編號：1976923