本文選題：CARex + PTDtat�。� 參考：《安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報》2013年07期

【摘要】：目的分別構(gòu)建和包裝攜帶CARex基因、PTDtat基因、CARex和PTDtat融合基因的重組腺病毒。方法采用基因重組技術(shù)將CARex基因、PTDtat基因、CARex和PTDtat融合基因克隆在腺病毒穿梭質(zhì)粒pAdtrack-CMV,經(jīng)過Pme I線性化后轉(zhuǎn)化BJ5183感受態(tài)細(xì)胞,與腺病毒骨架質(zhì)粒pAdEasy-1同源重組,構(gòu)建重組腺病毒質(zhì)粒pAd-CARex、pAd-PTDtat、pAd-CARex-PTDtat,然后轉(zhuǎn)化DH5α感受態(tài)細(xì)胞,大量制備重組腺病毒質(zhì)粒,經(jīng)過Pac I線性化后回收,在脂質(zhì)體介導(dǎo)下轉(zhuǎn)染293A細(xì)胞,通過倒置熒光顯微鏡觀察綠色熒光蛋白(GFP)的表達(dá)來確定病毒在細(xì)胞內(nèi)復(fù)制,當(dāng)細(xì)胞發(fā)生病變時證明病毒包裝成功。結(jié)果在293A包裝細(xì)胞系中成功包裝攜帶CARex、PTDtat、CARex和PTDtat基因的重組5型腺病毒,倒置熒光顯微鏡觀察到明顯的GFP表達(dá),PCR檢測表明包裝病毒含有目的基因,半數(shù)培養(yǎng)組織感染量(TICD50)顯示重組腺病毒具有較高的滴度。結(jié)論成功包裝了pAd-CARex、pAd-PTDtat、pAd-CARex-PTDtat重組腺病毒,為進(jìn)一步探討CARex和PTDtat基因?qū)ο俨《靖腥灸[瘤細(xì)胞效率的影響奠定了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
[Abstract]:Objective to construct and package the recombinant adenovirus carrying CARex gene pPTDtat gene pCARex and PTDtat fusion gene respectively. Methods CARex gene pAdtrack-CMV was cloned into adenovirus shuttle plasmid pAdtrack-CMV by gene recombination technique. After linearized with Pme I, it was transformed into BJ5183 receptive cells and was homologous recombined with adenovirus skeleton plasmid pAdEasy-1. The recombinant adenovirus plasmid pAd-CARexanpAd-PTDtatpAd-CARex-PTDtata was constructed, and then transformed into DH5 偽 competent cells. The recombinant adenovirus plasmid was linearized by Pac I and was recovered and transfected into 293A cells by liposome. The expression of green fluorescent protein (GFP) was observed by inverted fluorescence microscope to determine the replication of the virus in the cell, and it was proved that the virus was packaged successfully when the cell changed. Results Recombinant adenovirus type 5 was successfully packaged in 293A packaging cell line carrying CARexexia PTDtatCARex and PTDtat genes. Reverse fluorescence microscopy showed that the packaging virus contained the target gene. TICD 50) showed high titer of recombinant adenovirus. Conclusion the recombinant adenovirus pAd-CARex-PTDtat was successfully packaged, which laid an experimental foundation for further study of the effect of CARex and PTDtat genes on the efficiency of adenovirus infected tumor cells.
【作者單位】： 安徽醫(yī)科大學(xué)病原生物學(xué)教研室;安徽醫(yī)科大學(xué)生物化學(xué)教研室;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(編號:30771882、81271815)
【分類號】：R346

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本文編號：1968216