本文選題：日本血吸蟲 + 表膜�。� 參考：《中國寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志》2013年01期

【摘要】：目的篩選噬菌體十二肽庫中與日本血吸蟲(Shistosoma japonicum)脫尾童蟲表膜特異性結(jié)合而不與尾蚴表膜結(jié)合的短肽并鑒定。方法利用M13噬菌體十二肽庫,經(jīng)體外逆向差異篩選日本血吸蟲尾蚴和脫尾活童蟲,從第3輪回收的結(jié)合噬菌體中隨機(jī)挑取15個(gè)克隆進(jìn)行測序獲取目標(biāo)噬菌體后,采用ELISA法、洗脫回收率實(shí)驗(yàn)(以M13KE為陰性對照)和免疫組織化學(xué)法檢測日本血吸蟲脫尾童蟲、尾蚴與噬菌斑克隆的特異性結(jié)合。熒光顯微鏡觀察人工合成的陽性噬菌體短肽與日本血吸蟲脫尾童蟲體外的特異性結(jié)合。構(gòu)建目的片段pEGFP-C2質(zhì)粒體外轉(zhuǎn)染日本血吸蟲脫尾童蟲。結(jié)果經(jīng)3輪逆向差異篩選后.噬菌體回收率從第1輪的3.50×10~(-5)%到第3輪的3.20×10~(-2)%,富集度明顯提高。DNA測序結(jié)果表明,15個(gè)噬菌體克隆分別含有ZL6、ZL4和ZL1等3個(gè)不同的短肽序列。ELISA結(jié)果顯示,M13噬菌體短肽ZL4(MppZL4)、MppZL6和MppZL1分別與脫尾童蟲膜蛋白結(jié)合后的P/N值為6.72,3.65和2.22,分別與尾蚴膜蛋白結(jié)合后的P/N值為1.58,5.15和1.20。洗脫回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示.MppZL4與脫尾童蟲洗脫回收率[(4.60±0.27)×10~(-2)%]遠(yuǎn)高于MppZL6[(2.10±0.23)×10~(-3)%]、MppZL1[(1.20±0.28)×10~(-3)%]和M13KE[(1.30±0.60)×10~(-7)%)(P0.01)。免疫組化結(jié)果顯示,日本血吸蟲脫尾童蟲與MppZL4特異性結(jié)合.陽性率為83.0%(83/100)。熒光顯微鏡檢測結(jié)果顯示,人工合成的RhB-ZL4可與日本血吸蟲脫尾童蟲體外特異性結(jié)合。構(gòu)建的ZL4/pEGFP-C2質(zhì)粒體外可成功轉(zhuǎn)染日本血吸蟲脫尾童蟲。結(jié)論篩選獲得的短肽ZL4能與日本血吸蟲童蟲表膜特異性結(jié)合.不與尾蚴表膜結(jié)合。
[Abstract]:Objective to screen and identify short peptides from phage dodeceptide library that bind specifically to the surface membrane of Schistosoma japonicum but not to the surface membrane of cercariae. Methods the M13 phage dodecapeptide library was used to screen Schistosoma japonicum cercariae and live schistosomiasis japonicum by reverse differential screening in vitro. 15 clones were randomly selected from the third cycle of the combined phage and sequenced to obtain the target phage. The phage was obtained by ELISA method. The specific binding of Schistosoma japonicum, cercariae and plaque clone of Schistosoma japonicum was detected by elution recovery test (using M13KE as negative control) and immunohistochemical method. The specific binding of synthetic phage short peptide to Schistosoma japonicum in vitro was observed by fluorescence microscope. The target pEGFP-C2 plasmid was constructed and transfected into Schistosoma japonicum in vitro. Results after three rounds of reverse differential screening. The phage recovery rate ranged from 3.50 脳 10 ~ (-5)% in the first round to 3.20 脳 10 ~ (-2) in the third round. The results of DNA sequencing showed that the 15 phage clones contained three different short peptides, ZL6, ZL4 and ZL1, respectively. Elisa results showed that the phage short peptides ZL4, MppZL4, MppZL6 and MppZL1. The P / N values after binding to the membrane proteins were 6.72 3.65 and 2.22, respectively, and the P / N values were 1.585.15 and 1.20 after binding to the membrane proteins of cercariae, respectively. The results of elution recovery test showed that the recoveries of 路MppZL4 and Thunb were significantly higher than those of MppZL6 [2.10 鹵0.23) 脳 10 ~ (-3)%] and M13KE [1.30 鹵0.60) 脳 10 ~ (-1) ~ (-3)%] and M13KE [1.30 鹵0.60) 脳 10 ~ (-10) ~ (-7) ~ (-1) ~ (-1). Immunohistochemical results showed that Schistosoma japonicum was specifically bound to MppZL4. The positive rate was 83.0 / 100%. The results of fluorescence microscopy showed that the synthetic RhB-ZL4 could specifically bind to Schistosoma japonicum in vitro. The constructed ZL4/pEGFP-C2 plasmid was successfully transfected into Schistosoma japonicum in vitro. Conclusion the short peptide ZL4 can specifically bind to the surface membrane of Schistosoma japonicum. Not bound to cercariae surface membrane.
【作者單位】： 南華大學(xué)醫(yī)學(xué)院寄生蟲學(xué)教研室;中南大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院細(xì)胞與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中心;
【基金】：教育部博士點(diǎn)基金博導(dǎo)類資助項(xiàng)目(No.20110162110029) 國家自然科學(xué)基金(No.81101274) 湖南省自然科學(xué)基金(No.10JJ3010) 湖南省教育廳優(yōu)秀青年項(xiàng)目(No.11B106)~~
【分類號】：R392

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本文編號：1947140