本文選題：胸腺 + T淋巴細(xì)胞��； 參考：《山東大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：在對(duì)胸腺的功能研究中,一直把胸腺當(dāng)作一個(gè)免疫"特赦"器官看待,抗原和大分子不能進(jìn)入胸腺?gòu)亩苊饬诵叵賰?nèi)發(fā)生免疫反應(yīng)。根據(jù)中樞耐受理論,如果在胸腺內(nèi)植入外界抗原,那么該抗原將會(huì)被發(fā)育中的T細(xì)胞識(shí)別并對(duì)陽(yáng)性選擇和陰性選擇產(chǎn)生影響進(jìn)而形成耐受。根據(jù)我們先前的研究發(fā)現(xiàn),當(dāng)把腫瘤細(xì)胞注射到胸腺后,并沒(méi)有誘導(dǎo)形成腫瘤細(xì)胞的耐受,腫瘤細(xì)胞最終會(huì)被清除。并且流式分析顯示,在注射人肺癌細(xì)胞A549后,胸腺內(nèi)CD4+、CD8+T細(xì)胞的數(shù)量增加。那么這些增多的淋巴細(xì)胞會(huì)不會(huì)是來(lái)自于外周呢?在給免疫缺陷小鼠移植T細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),異體的成熟T細(xì)胞可以進(jìn)入胸腺,但正常小鼠的外周成熟T細(xì)胞是否也具有這種現(xiàn)象還不確定。因此針對(duì)以上問(wèn)題,我們選用正常小鼠作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,首先在其脾臟中注射CFDA SE熒光染料,通過(guò)流式檢測(cè)胸腺內(nèi)是否含有表達(dá)CFDA SE熒光信號(hào)的細(xì)胞,檢測(cè)外周T細(xì)胞能遷回胸腺;其次我們?cè)谕庵苊庖哌^(guò)人肺癌細(xì)胞A549抗原的小鼠和未免疫小鼠的胸腺中分別注射等量的A549細(xì)胞,通過(guò)石蠟切片和流式細(xì)胞術(shù)分析對(duì)比胸腺內(nèi)發(fā)生的免疫反應(yīng)、抗原細(xì)胞在胸腺內(nèi)的狀態(tài)以及T細(xì)胞亞群含量的變化,并對(duì)發(fā)生于胸腺的應(yīng)答反應(yīng)做進(jìn)一步探究。通過(guò)以上實(shí)驗(yàn),我們得到以下結(jié)果:1.胸腺內(nèi)可以檢測(cè)到CFDA SE陽(yáng)性細(xì)胞,并且這些細(xì)胞絕大多數(shù)呈CD3陽(yáng)性;2.石蠟切片結(jié)果顯示,免疫小鼠的胸腺內(nèi)發(fā)生的免疫反應(yīng)較未免疫小鼠更加劇烈,胸腺在相對(duì)較短的時(shí)間內(nèi)即可恢復(fù)正常;3.流式分析結(jié)果顯示,與未免疫小鼠相比,A549細(xì)胞在免疫小鼠胸腺內(nèi)的存活時(shí)間縮短;4.胸腺微創(chuàng)注射后第5天,外周免疫小鼠和未免疫小鼠與未進(jìn)行胸腺微創(chuàng)注射的小鼠相比,胸腺中CD4+和CD8+T細(xì)胞的數(shù)量都明顯增加,但免疫小鼠的胸腺中CD8+/CD4+的比值較未免疫小鼠顯著升高,而未免疫小鼠與未進(jìn)行胸腺微創(chuàng)注射的小鼠之間無(wú)明顯差異。通過(guò)以上結(jié)果,我們得出以下結(jié)論:1.正常小鼠的胸腺內(nèi)存在來(lái)自外周的T細(xì)胞。這種回遷現(xiàn)象不僅發(fā)生于免疫缺陷小鼠,也發(fā)生于正常小鼠。2.用抗原外周免疫后,當(dāng)胸腺內(nèi)再次出現(xiàn)相同抗原時(shí),胸腺內(nèi)會(huì)發(fā)生更加及時(shí)、劇烈的免疫反應(yīng)。根據(jù)以上結(jié)論,我們推測(cè)外周免疫后一部分記憶T細(xì)胞進(jìn)入胸腺,當(dāng)再次遇到相應(yīng)抗原時(shí),記憶T細(xì)胞迅速增殖并對(duì)抗原產(chǎn)生記憶性殺傷。外周成熟T細(xì)胞回歸胸腺可能是機(jī)體保護(hù)胸腺免于抗原感染的一種正常機(jī)制,防止機(jī)體形成對(duì)外來(lái)抗原的耐受。
[Abstract]:In the study of thymus function, the thymus has been regarded as an immune "amnesty" organ. Antigens and macromolecules can not enter the thymus, thus avoiding the immune reaction in the thymus. According to the central tolerance theory, if an external antigen is implanted in the thymus, the antigen will be recognized by the developing T cells and will affect the positive and negative selection, thus forming tolerance. According to our previous studies, when the tumor cells were injected into the thymus, the tumor cells were not induced to develop tolerance, and the tumor cells were eventually eliminated. Flow analysis showed that the number of CD4 CD8 T cells in thymus increased after injection of human lung cancer cell line A549. So are these increased lymphocytes coming from the periphery? It was found that allogeneic mature T cells could enter the thymus in immunodeficient mice, but it was uncertain whether the peripheral mature T cells in normal mice had the same phenomenon. To solve the above problems, we selected normal mice as the experimental object. First, we injected CFDA SE fluorescent dye into the spleen, and detected whether there were any cells expressing CFDA SE fluorescence signal in the thymus by flow cytometry. Then we injected the same amount of A549 cells into the thymus of mice immunized with human lung cancer cell A549 antigen and non-immunized mice respectively. The immune reaction in thymus, the state of antigen cells in thymus and the content of T cell subsets were analyzed and compared by paraffin section and flow cytometry, and the response reaction occurred in thymus was further explored. Through the above experiment, we get the following result: 1. CFDA SE positive cells can be detected in thymus, and most of these cells are CD3 positive. The results of paraffin section showed that the immune reaction in thymus of immunized mice was more intense than that of unimmunized mice, and the thymus could return to normal in a relatively short time. The results of flow cytometry showed that the survival time of A549 cells in thymus of immunized mice was shorter than that of unimmunized mice. On the 5th day after microinvasive thymus injection, the number of CD4 and CD8 T cells in thymus of peripheral immunized mice and unimmunized mice were significantly increased compared with those of mice without thymus microinvasive injection. However, the ratio of CD8 / CD4 in thymus of immunized mice was significantly higher than that of unimmunized mice, but there was no significant difference between the unimmunized mice and the mice without thymus microinvasive injection. From the above results, we draw the following conclusion: 1. In normal mice thymus there are T cells from the periphery. This migration occurs not only in immunodeficient mice, but also in normal mice. After peripheral immunization with antigens, when the same antigen appears again in the thymus, there will be a more timely and intense immune response in the thymus. According to the above conclusions, we speculate that a part of memory T cells enter the thymus after peripheral immunization. When the corresponding antigens are encountered again, the memory T cells proliferate rapidly and produce memory killing to the antigens. The return of peripheral mature T cells to thymus may be a normal mechanism to protect thymus from antigen infection and prevent the formation of tolerance to foreign antigens.
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R392

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