B族G蛋白偶聯(lián)受體PAC1的N端基序HSDCIF對(duì)其二聚化和上膜運(yùn)輸?shù)挠绊?/H1>
發(fā)布時(shí)間：2018-05-15 18:30
本文選題：B族G蛋白偶聯(lián)受體(GPCRs) + PAC�。� 參考：《中國(guó)生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào)》2013年09期
【摘要】：B族G蛋白偶聯(lián)受體(G protein-coupled receptors,GPCRs)PAC1是垂體腺苷酸環(huán)化酶激活多肽(pituitary adenylate cyclase activating polypeptide,PACAP)的特異受體,介導(dǎo)PACAP神經(jīng)保護(hù)等功能,是神經(jīng)系統(tǒng)疾病藥物開(kāi)發(fā)的重要靶點(diǎn)之一.HSDCIF(His-Ser-Asp-Cys-Ile-Phe)為位于PAC1的N端胞外1區(qū)(extracellar domain 1,EC1)的一段短肽序列,與特定負(fù)責(zé)激活PAC1受體的激動(dòng)域PACAP(1-6)具有極高的同源性.利用基因敲除技術(shù)構(gòu)建出缺陷HSDCIF基序的PAC1突變體(簡(jiǎn)稱D-PAC1);利用基因工程原理和技術(shù)構(gòu)建系列真核表達(dá)重組載體,包括融合了增強(qiáng)型黃色熒光蛋白(enhanced yellow fluorescent protein,EYFP)的表達(dá)載體D-PAC1-EYFP;用于生物發(fā)光能量轉(zhuǎn)移(bioluminescence resonance energy transfer,BRET)檢測(cè)的D-PAC1-Rluc;以及用于雙分子熒光互補(bǔ)(bimolecular fluorescence complementation,BiFC)實(shí)驗(yàn)的D-PAC1-EYFP/N和D-PAC1-EYFP/C.免疫熒光檢測(cè)(immunofluorescence assay)測(cè)定D-PAC1的表達(dá);熒光共聚焦顯微觀察D-PAC1的細(xì)胞運(yùn)輸,然后通過(guò)Western印跡、BRET與BiFC方法來(lái)檢測(cè)D-PAC1的二聚化情況,綜合評(píng)價(jià)HSDCIF基序?qū)AC1二聚化和在細(xì)胞中定位的影響.檢測(cè)結(jié)果顯示,缺陷HSDCIF基序的突變體D-PAC1不能發(fā)生二聚化,也不能正常的進(jìn)行上膜運(yùn)輸,而是滯留在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中,同時(shí)外源化學(xué)合成的寡肽HSDCIF可以競(jìng)爭(zhēng)性地抑制正常PAC1的二聚化.
[Abstract]:The B G protein coupled receptor (G protein-coupled receptors, GPCRs) PAC1 is a specific receptor for pituitary adenylate cyclase activating polypeptide (pituitary adenylate cyclase activating polypeptide), which mediates the function of neuroprotection, which is one of the most important targets in the development of neurologic diseases. A short peptide sequence of the 1 region (Extracellar domain 1, EC1) in the N terminal of PAC1 is highly homologous to the specific PACAP (1-6) responsible for activating the PAC1 receptor in the PACAP (1-6). Using gene knockout technique to construct a PAC1 mutant of the defective HSDCIF based sequence (referred to as D-PAC1), and to construct a series of eukaryotic expression restructures using genetic engineering principles and techniques. The carrier, including the expression vector D-PAC1-EYFP that combines the enhanced yellow fluorescent protein (EYFP), and the D-PAC1-Rluc for the detection of the bioluminescence energy transfer (bioluminescence resonance energy transfer, BRET); and for the fluorescence complementation of the bioluminescence. D-PAC1-EYFP/N and D-PAC1-EYFP/C. immunofluorescence assay (immunofluorescence assay) were used to determine the expression of D-PAC1; fluorescence confocal microscopy was used to observe the cell transport of D-PAC1, and then the dimerization of D-PAC1 was detected by Western blotting, BRET and BiFC methods, and a comprehensive evaluation of HSDCIF sequence on PAC1 dimerization and localization in cells. The results show that the mutant D-PAC1 of the defective HSDCIF based sequence can not produce dimerization, nor does it normally carry on the upper membrane transport, but is detained in the endoplasmic reticulum, and the exogenous chemical synthesized oligopeptide HSDCIF can competitively inhibit the dimerization of normal PAC1.
【作者單位】： 暨南大學(xué)生命科學(xué)技術(shù)學(xué)院生物工程研究所;廣東醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)教研室;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(No.31100545,No.31200679) 廣東省自然科學(xué)基金項(xiàng)目(No.S2011010002931) 廣東省科技計(jì)劃項(xiàng)目(No.2011B031800388)資助~~
【分類號(hào)】：R363
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本文編號(hào)：1893435
本文鏈接：http://sikaile.net/yixuelunwen/jichuyixue/1893435.html
本文選題：B族G蛋白偶聯(lián)受體(GPCRs) + PAC�。� 參考：《中國(guó)生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào)》2013年09期
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【作者單位】： 暨南大學(xué)生命科學(xué)技術(shù)學(xué)院生物工程研究所;廣東醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)教研室;
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【參考文獻(xiàn)】
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8 朱磊;吳梅芝;趙林;黃綺玲;梁梅;李黃金;;EGFR二聚化B細(xì)胞表位抗原肽基因克隆、表達(dá)與純化[J];免疫學(xué)雜志;2011年10期
9 劉虹辰;奚曉東;;干細(xì)胞因子受體c-Kit的研究進(jìn)展[J];醫(yī)學(xué)綜述;2009年21期
10 李國(guó)元,格日力;缺氧性應(yīng)激反應(yīng)的分子機(jī)制[J];青海醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2005年01期
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2 石毅;周筠梅;;疏水熒光探針bis-ANS對(duì)Trigger factor分子伴侶功能及二聚化的影響[A];第七屆全國(guó)酶學(xué)學(xué)術(shù)討論會(huì)論文摘要集[C];2004年
3 諶立偉;高燦;周德和;池志強(qiáng);;表達(dá)在昆蟲(chóng)細(xì)胞上人μ阿片受體的二聚化作用[A];中國(guó)藥理學(xué)會(huì)第十屆全國(guó)神經(jīng)學(xué)術(shù)會(huì)議暨浙江省藥理學(xué)會(huì)2002年年會(huì)論文摘要集[C];2002年
4 趙貞;彭藝;郝淑鳳;曾宗浩;王志珍;;二聚化作用賦予分子伴侶和異構(gòu)酶活性[A];中國(guó)蛋白質(zhì)組學(xué)第二屆學(xué)術(shù)大會(huì)論文摘要論文集[C];2004年
5 逄莎莎;彭克美;劉華珍;宋卉;王云;張玉丹;;G蛋白偶聯(lián)受體研究進(jìn)展[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)動(dòng)物解剖學(xué)及組織胚胎學(xué)分會(huì)第十六次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2010年
6 江雅新;馬新勇;王強(qiáng);肖澤宇;方曉紅;陳曄光;;絲氨酸／蘇氨酸激酶受體的單體二聚化現(xiàn)象[A];第十次中國(guó)生物物理學(xué)術(shù)大會(huì)論文摘要集[C];2006年
7 顧南南;楊洪全;;擬南芥phyB與CRY1結(jié)構(gòu)與功能關(guān)系的研究[A];2007中國(guó)植物生理學(xué)會(huì)全國(guó)學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要匯編[C];2007年
8 王志珍;;巰基蛋白質(zhì)氧化還原酶的折疊酶活性與其二聚化作用[A];第一屆全國(guó)腦與認(rèn)知科學(xué)學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2005年
9 曹麗華;王述森;姜莉;羅陽(yáng);;近端指(趾)間關(guān)節(jié)粘連基因突變鑒定及功能研究[A];東北三省及內(nèi)蒙古地區(qū)遺傳學(xué)研究進(jìn)展學(xué)術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];2009年
10 劉劍峰;黃思羅;涂海軍;Philippe Rondard;Jean-Philippe Pin;;GABA_BR激活過(guò)程中VFT區(qū)和HD區(qū)間相互作用機(jī)制及其調(diào)控的下游信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的研究[A];湖北省暨武漢市生物化學(xué)與分子生物學(xué)學(xué)會(huì)第八屆第十七次學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2007年
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3 記者 韓曉玲 實(shí)習(xí)生 吳曉琴 通訊員 邢瑩瑩;華中科大教授獲法國(guó)棕櫚騎士教育勛章[N];湖北日?qǐng)?bào);2011年
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3 陸錦玲;β-分泌酶活性及其二聚化的動(dòng)態(tài)光學(xué)成像研究[D];華中科技大學(xué);2007年
4 黃思羅;C族G蛋白偶聯(lián)受體激活機(jī)制的精細(xì)研究[D];華中科技大學(xué);2009年
5 劉鑫;內(nèi)嗎啡肽類似物和阿片肽受體異源二聚化的分子模擬研究[D];蘭州大學(xué);2010年
6 鄢永紅;導(dǎo)電聚合物中的載流子動(dòng)力學(xué)研究[D];復(fù)旦大學(xué);2006年
7 余曉玲;HAb18G/CD147晶體結(jié)構(gòu)—免疫球蛋白超家族新二聚化模式的發(fā)現(xiàn)[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2008年
8 詹紅兵;無(wú)機(jī)基金屬酞菁復(fù)合固態(tài)光限幅材料制備與光譜學(xué)性能研究[D];浙江大學(xué);2003年
9 李愛(ài)玉;從金屬原子鏈到金屬納米線：結(jié)構(gòu)和電子性質(zhì)[D];廈門大學(xué);2006年
10 曹廣春;小菜蛾P(guān)lutella xylostella （L.）對(duì)蟲(chóng)酰肼的抗性及其機(jī)理研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2007年
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1 郭曉令;B族G蛋白偶聯(lián)受體PAC1二聚化及其N端HSDCIF基序?qū)ζ涠刍挠绊慬D];暨南大學(xué);2013年
2 唐穎;c-Jun亮氨酸拉鏈結(jié)合蛋白（Jlip）和干擾素誘導(dǎo)的蛋白IFP35及其自身的相互作用研究[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2004年
3 張寧;利用FRET技術(shù)檢測(cè)緩激肽受體和Apelin受體二聚化的實(shí)驗(yàn)研究[D];曲阜師范大學(xué);2013年
4 陳新義;準(zhǔn)一維磁性系統(tǒng)熱力學(xué)性質(zhì)的研究[D];蘇州大學(xué);2002年
5 周孟華;μ型阿片受體與催產(chǎn)素受體二聚化的研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2007年
6 王凱華;μ型阿片受體與催產(chǎn)素受體二聚化介導(dǎo)催產(chǎn)素抑制嗎啡耐受的研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2009年
7 張冰;電子關(guān)聯(lián)對(duì)聚合物中激子和雙激子極化性質(zhì)的影響[D];河北師范大學(xué);2009年
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9 趙聲明;轉(zhuǎn)JAK2基因調(diào)控的多潛能造血干/祖細(xì)胞體外長(zhǎng)期擴(kuò)增及定向分化實(shí)驗(yàn)研究[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2007年
10 張洋;人表皮生長(zhǎng)因子受體酪氨酸激酶的克隆表達(dá)和酶抑制劑篩選模型的構(gòu)建[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2008年
，本文編號(hào)：1893435
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