hTERT啟動(dòng)子調(diào)控的PUMA重組腺病毒的構(gòu)建與鑒定
本文選題:端粒 + 末端轉(zhuǎn)移酶; 參考:《重慶醫(yī)學(xué)》2013年36期
【摘要】:目的構(gòu)建人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶(hTERT)啟動(dòng)子調(diào)控的PUMA基因腺病毒載體(Ad-hTERT-PUMA)及帶有增強(qiáng)型綠色熒光蛋白(EGFP)基因的腺病毒載體(Ad-hTERT-PUMA-EGFP)。方法采用一系列的分子生物學(xué)技術(shù)將p53正向凋亡調(diào)控因子PUMA基因插入hTERT的啟動(dòng)子下游,再將EGFP為分子標(biāo)記插入到PUMA基因下游,最終將構(gòu)建好的載體裝入腺病毒。雙酶切實(shí)驗(yàn)證明重組腺病毒載體Ad-hTERT-PUMA和Ad-hTERT-PUMA-EGFP構(gòu)建是否成功。結(jié)果載體均成功轉(zhuǎn)配腺病毒。轉(zhuǎn)染12h后,部分HEK293細(xì)胞出現(xiàn)了綠色熒光,可維持到72h。結(jié)論成功構(gòu)建重組腺病毒載體Ad-hTERT-PUMA和Ad-hTERT-PUMA-EGFP。
[Abstract]:Objective to construct human telomerase reverse transcriptase (hTERT) promoter regulated adenovirus vector Ad-hTERT-PUMAand adenovirus vector Ad-hTERT-PUMA-EGFPN with enhanced green fluorescent protein (EGFP) gene. Methods A series of molecular biological techniques were used to insert p53 PUMA gene into the downstream promoter of hTERT, and then EGFP was inserted into the downstream of PUMA gene. Finally, the constructed vector was inserted into adenovirus. The recombinant adenovirus vectors Ad-hTERT-PUMA and Ad-hTERT-PUMA-EGFP were successfully constructed by double enzyme digestion. Results all the vectors were successfully transformed into adenovirus. After transfection for 12 h, some HEK293 cells showed green fluorescence, which could be maintained until 72 h. Conclusion Recombinant adenovirus vectors Ad-hTERT-PUMA and Ad-hTERT-PUMA-EGFPwere successfully constructed.
【作者單位】: 重慶市腫瘤研究所婦瘤科;
【基金】:重慶市衛(wèi)生局課題(2011-2-366)
【分類號(hào)】:R341
【共引文獻(xiàn)】
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【相似文獻(xiàn)】
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3 程軼U,
本文編號(hào):1892061
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